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申请/专利权人：东北林业大学
摘要：本发明属于农业生物技术领域和植物基因工程领域，公开了一种农杆菌介导的鸢尾青种转化方法。该方法的主要步骤包括：选取子房膨大但尚未成熟的鸢尾青种，4℃冷藏48h；调整含有目标载体的工程农杆菌菌液至适当浓度，收集菌株，使用LSA进行重悬；使用75％酒精和5％次氯酸钠对青种进行消毒；将消毒后的青种沿着果荚棱切开，对种子造成伤口；将造成伤口的种子放入AS液体中浸泡30min，放入LSA侵染液中，150rpm·min‑128℃条件下摇培侵染14h；经上述方式处理后的外植体置于超净台中晾干，转接于共培养基PSA中暗培养7d；转入筛选培养基PWH中光照培养；荧光灯照射PCR扩增筛选阳性植株。
主权项：1.一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法，包含以下步骤：1选取子房膨大但尚未成熟的鸢尾青种，4℃冷藏48h；2调整含有目标载体的工程农杆菌菌液至适当浓度，收集菌株，使用LSA进行重悬；3使用75％酒精和5％次氯酸钠对青种进行消毒；4将消毒后的青种沿着果荚棱切开，对种子造成伤口；5将造成伤口的种子放入AS液体中浸泡30min，放入LSA侵染液中，150rpm·min-128℃条件下摇培侵染14h；6经上述方式处理后的外植体置于超净台中晾干，转接于共培养基PSA中暗培养7d；7转入筛选培养基PWH中光照培养。所述步骤1中的青种为未成熟的玉蝉花、黄菖蒲、燕子花和野鸢尾种子。所述步骤2中的LSA重悬液为LB+Sugar+AS液体培养基。所述步骤6中的PSA共培养基为Paper+Sugar+AS培养基。所述步骤7中的PWH共培养基为Paper+Water+Hyg培养基。本发明实施例中所述重悬液中农杆菌菌液OD600为1.8。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东北林业大学 一种农杆菌介导的鸢尾青种遗传转化方法
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