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申请/专利权人：江苏大学
摘要：本发明提供了一种β‑葡聚糖合成酶活力的检测试剂盒、检测方法及应用，属于酶技术领域；本发明中，所述用于测定β‑葡聚糖合成酶活力的试剂盒，主要包括具有水解尿苷二磷酸UDP释放磷酸根的外核苷三磷酸二磷酸水解酶ENTDP和测定所释放的磷酸根含量的试剂；所述测定β‑葡聚糖合成酶活力的试剂盒可以快速准确地测定β‑葡聚糖合成酶以UDP‑葡萄糖为底物合成β‑葡聚糖糖链过程中形成的副产物尿苷二磷酸UDP的含量，据此准确计算其活力；所述测定β‑葡聚糖合成酶活力的试剂盒和测定方法具有设备要求低、操作安全简便、灵敏度高、低成本等明显优势。
主权项：1.一种测定β-葡聚糖合成酶活力的方法，其特征在于，所述方法中采用的试剂盒包括β-葡聚糖合成酶酶解底物、外核苷三磷酸二磷酸水解酶ENTDP和测定UDP水解释放磷酸根含量的试剂；所述ENTDP的核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.5或SEQIDNO.9所示，其氨基酸序列如SEQIDNO.2、SEQIDNO.6或SEQIDNO.10所示；所述β-葡聚糖合成酶酶解底物为UDP-葡萄糖；所述方法包括：（1）将待测β-葡聚糖合成酶与所述β-葡聚糖合成酶酶解底物于温度25~40℃、pH4.0~9.0条件下反应30min~48h；（2）向步骤（1）的反应溶液中加入外核苷三磷酸二磷酸水解酶ENTDP，于温度25~50℃、pH4.0~9.0、金属离子0.1~2.0μmolmL条件下反应10min~2h；（3）测定UDP水解释放磷酸根含量或消耗酶解底物的量；步骤（2）中，添加的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的ENTDP时，于温度为35℃、pH7.0、金属离子Zn2+0.5μmolmL条件下反应；添加的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的ENTDP时，于温度为40℃、pH8.0、金属离子Ca2+1.0μmolmL条件下反应；添加的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的ENTDP时，于温度为30℃、pH6.0、金属离子Zn2+0.7μmolmL条件下反应。
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权利要求：
百度查询： 江苏大学 一种β-葡聚糖合成酶活力的检测试剂盒、检测方法及应用
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