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一种羰基还原酶突变体及其应用 

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申请/专利权人:默沃智造(上海)生物技术有限公司;江苏百奥信康医药科技有限公司

摘要:本发明提供一种羰基还原酶及其应用。该羰基还原酶是以来源于Bacillussp.LJBS06、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的羰基还原酶BlKRED为出发序列进行突变所得到,其用于底物4‑氯乙酰乙酸乙酯的催化还原反应中,与野生型相比,酶的活性更高,反应速度更快,能缩短反应周期,产物光学纯度高,具有良好的工业应用前景。

主权项:1.一种羰基还原酶突变体,其特征在于,所述羰基还原酶突变体是以来源于Bacillussp.LJBS06、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的羰基还原酶BlKRED为出发序列,进行以下氨基酸替换所得到的氨基酸序列:突变体1:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V的氨基酸序列;突变体3:对应于SEQIDNO:2的第83位的M替换为I的氨基酸序列;突变体4:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L的氨基酸序列;突变体6:对应于SEQIDNO:2的第129位的V替换为I的氨基酸序列;突变体7:对应于SEQIDNO:2的第133位的T替换为S的氨基酸序列;突变体11:对应于SEQIDNO:2的第163位的F替换为L的氨基酸序列;突变体15:对应于SEQIDNO:2的第182位的M替换为V的氨基酸序列;突变体17:对应于SEQIDNO:2的第185位的E替换为D的氨基酸序列;突变体19:对应于SEQIDNO:2的第188位的A替换为V的氨基酸序列;突变体20:对应于SEQIDNO:2的第188位的A替换为S的氨基酸序列;突变体27:对应于SEQIDNO:2的第27位的E替换为V和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体30:对应于SEQIDNO:2的第115位的M替换为L和第173位的H替换为N的氨基酸序列;突变体32:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T和第173位的H替换为N的氨基酸序列;突变体33:对应于SEQIDNO:2的第185位的E替换为D和第190位的I替换为V的氨基酸序列;突变体34:对应于SEQIDNO:2的第187位的Q替换为N和第196位的K替换为N的氨基酸序列;突变体35:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体36:对应于SEQIDNO:2的第31位的L替换为M和第52位的N替换为D的氨基酸序列;突变体37:对应于SEQIDNO:2的第52位的N替换为N和第214位的R替换为C的氨基酸序列;突变体38:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L、第185位的E替换为D和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体41:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T、第115位的M替换为L和第173位的H替换为N的氨基酸序列;突变体42:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T、第173位的H替换为N和第239位的M替换为I的氨基酸序列;突变体45:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L、第133位的T替换为S和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体46:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L、第129位的V替换为I和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体47:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L、第196位的K替换为E和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体48:对应于SEQIDNO:2的第52位的N替换为K、第84位的V替换为L、第163位的F替换为L和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体50:对应于SEQIDNO:2的第27位的E替换为V、第83位的M替换为I、第84位的V替换为L和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体51:对应于SEQIDNO:2的第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第84位的V替换为L和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体52:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L和第173位的H替换为N的氨基酸序列;突变体53:对应于SEQIDNO:2的第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第173位的H替换为N和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体54:对应于SEQIDNO:2的第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第185位的E替换为D和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体55:对应于SEQIDNO:2的第27位的E替换为V、第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第82位的G替换为A和第84位的V替换为L的氨基酸序列;突变体56:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第173位的H替换为N和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体57:对应于SEQIDNO:2的第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第185位的E替换为D、第188位的A替换为V和第200位的H替换为Y的氨基酸序列;突变体58:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第185位的E替换为D和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体59:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第185位的E替换为D、第188位的A替换为V和第200位的H替换为Y的氨基酸序列;突变体60:对应于SEQIDNO:2的第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第185位的E替换为D和第208位的N替换为D的氨基酸序列;突变体61:对应于SEQIDNO:2的第36位的A替换为T、第41位的E替换为K、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第208位的N替换为D和第239位的M替换为I的氨基酸序列;突变体62:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第36位的A替换为T、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第208位的N替换为D和第239位的M替换为I的氨基酸序列;突变体63:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第36位的A替换为T、第41位的E替换为K、第65位的S替换为G、第71位的R替换为H、第115位的M替换为L、第173位的H替换为N和第239位的M替换为II17VS19LA36TE41KS65GR71HM115LH173NM239I的氨基酸序列;突变体64:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第36位的A替换为T、第41位的E替换为K、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第208位的N替换为D和第239位的M替换为I的氨基酸序列;突变体65:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第36位的A替换为T、第41位的E替换为K、第57位的E替换为D、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第208位的N替换为D和第239位的M替换为I的氨基酸序列;突变体66:对应于SEQIDNO:2的第17位的I替换为V、第19位的S替换为L、第36位的A替换为T、第65位的G替换为S、第71位的R替换为H、第84位的V替换为L、第115位的M替换为L、第129位的V替换为I、第173位的H替换为N、第208位的N替换为D和第239位的M替换为I的氨基酸序列;或者,对各突变体的氨基酸序列在保持酶活性范围内,进行一个或多个氨基酸的替换、缺失、改变、插入或增加,所得到的氨基酸序列。

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