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申请/专利权人：江苏海洋大学;伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种利用MBP促溶标签可溶性表达糜蛋白酶的生产工艺，重组质粒载体的构建；培养重组质粒载体并向培养体系中添加IPTG进行诱导培养，诱导重组菌产生带有MBP促溶标签可溶性表达的糜蛋白酶，得到诱导后菌体；将诱导后菌体重悬破碎并通过MBP填料进行初次纯化；向初次纯化后的蛋白溶液中加入HRV‑3C蛋白酶切除MBP促溶标签并加入胰蛋白酶进行酶原激活；再次使用MBP填料纯化去除溶液中的MBP标签得到纯度更高的糜蛋白酶酶液。本发明的生产工艺通过利用MBP促溶标签技术，成功实现了糜蛋白酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达与纯化，而且简化了生产流程，降低了成本。
主权项：1.一种利用MBP促溶标签可溶性表达糜蛋白酶的生产工艺，其特征在于：具体步骤如下：步骤1：重组质粒载体的构建；将含有糜蛋白酶酶原基因的重组质粒载体转化宿主菌，得到重组菌；步骤2：培养重组菌并向培养体系中添加IPTG进行诱导培养，诱导重组菌产生带有MBP促溶标签可溶性表达的糜蛋白酶，得到诱导后菌体；步骤3：将诱导后菌体重悬破碎并通过MBP填料进行初次纯化；步骤4：向初次纯化后的蛋白溶液中加入HRV-3C蛋白酶切除MBP促溶标签并加入胰蛋白酶进行酶原激活；步骤5：再次使用MBP填料纯化去除溶液中的MBP标签得到纯度更高的糜蛋白酶酶液。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏海洋大学 伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司 一种利用MBP促溶标签可溶性表达糜蛋白酶的生产工艺
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