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申请/专利权人：江苏海洋大学;伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
摘要：本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体公开了一种利用MBP促溶标签可溶性表达和纯化重组胰蛋白酶的方法，步骤1：将含有胰蛋白酶编码基因的重组表达载体转化宿主菌，得到重组菌；步骤2：培养所述重组菌至OD600为0.6‑0.8时，向培养体系中添加0.5mM的IPTG进行诱导培养，诱导所述重组菌产生胰蛋白酶酶原，得到诱导后菌体；步骤3：从所述诱导后菌体中纯化得到重组胰蛋白酶。本发明通过选择表达载体、宿主菌及优化培养诱导条件，控制毒性蛋白的本底表达，当宿主生长到一定浓度时经诱导物诱导，目的蛋白可以一段时间内以可溶的形式大量表达，成功的在大肠杆菌中表达了胰蛋白酶，实现了重组胰蛋白酶的生产，为胰蛋白酶的广泛药物应用铺平了道路。
主权项：1.一种利用MBP促溶标签可溶性表达和纯化重组胰蛋白酶的方法，其特征在于：具体步骤如下：步骤1：将含有胰蛋白酶编码基因的重组表达载体转化宿主菌，得到重组菌；表达载体中含有T7RNA聚合酶识别的T7启动子、MBP促溶标签、HRV3C蛋白酶识别位点以及His6标签，MBP促溶标签用于促进胰蛋白酶的可溶性表达；HRV3C蛋白酶识别位点用于将MBP标签与胰蛋白酶原分开；His6标签用于胰蛋白酶原的纯化；宿主菌为大肠杆菌菌株；T7启动子用于启动胰蛋白酶编码基因的表达；步骤2：培养所述重组菌至OD600为0.6-0.8时，向培养体系中添加0.5mM的IPTG进行诱导培养，诱导所述重组菌产生胰蛋白酶酶原，得到诱导后菌体；步骤3：从所述诱导后菌体中纯化得到重组胰蛋白酶。
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