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申请/专利权人：东莞市第八人民医院(东莞市儿童医院)
摘要：本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用，该制备方法包括如下步骤：1脐带处理；2换液；3细胞传代；4间充质干细胞制备；5脐带间充质干细胞外泌体制备；6外泌体原液纯化浓缩。本发明的脐带间充质干细胞外泌体可用于治疗口唇疱疹的药物，涂抹在患者疱疹处，治疗效果好，可快速控制病情发展，大大缩短愈时间；对口唇疱疹患者的总显效率100％，不含抗生素和激素，对口唇温和无刺激、无毒副作用。
主权项：1.一种脐带间充质干细胞外泌体在制备治疗口唇疱疹的药物中的应用，其特征在于：所述药物剂型为外用液体制剂中的搽剂，将脐带间充质干细胞外泌体直接涂抹在疱疹处，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤：1脐带处理：将脐带剪成若干小段并洗涤，然后撕取华通氏胶并充分剪碎，离心洗涤后接种于培养瓶进行培养；2换液：隔一段时间取出部分培养基，并加入新的培养基，观察细胞生长情况，待有细胞爬出后，在长出位置做好标记；3细胞传代：弃去培养瓶中的培养基和组织块，洗涤，加入胰酶，离心弃上清，将细胞接种至新的培养瓶继续培养，重复上述步骤传代多次；4间充质干细胞制备：取第6代培养瓶弃去培养基和组织块，洗涤，加入胰酶，离心弃上清，加入干细胞冻存液重悬，得到间充质干细胞悬液；5脐带间充质干细胞外泌体制备：取间充质干细胞悬液离心，弃上清后接种于新的培养瓶进行培养，当细胞贴壁生长程度大于70％后，弃去上清，加入培养基继续培养，收集上清得到脐带间充质干细胞外泌体原液；6外泌体原液纯化浓缩：将脐带间充质干细胞外泌体原液依次经真空抽滤，切向流过滤膜包浓缩，再次真空过滤，得到脐带间充质干细胞外泌体纯化浓缩液；所述步骤6具体包括如下步骤：6.1用孔径为0.45μm的真空抽滤杯过滤，初步去除细胞碎片杂质；6.2再用孔径大小为100KD的切向流过滤膜包进行浓缩，浓缩到外泌体原液体积的110后，加入等体积的PBS继续进行浓缩；6.3重复加入等体积PBS十次进行置换；6.4最后用孔径大小为0.22μm的真空抽滤杯过滤，得到10X的外泌体纯化浓缩液，-80℃储存。
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