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申请/专利权人：竹石生物科技(苏州)有限公司
摘要：本申请公开了一种DNA甲基化测序文库及其构建方法和检测方法。本申请在建立测序文库时并未对双链DNA进行末端修复，而是先将双链DNA变性为单链DNA，然后利用该单链DNA作为建库模板并结合酶学转化法来建立DNA甲基化测序文库，因此，本申请能够避免由于进行末端修复而带来的修复碱基被测序仪读取的现象，从而避免由此造成的测序数据冗余现象。另外，本申请并未采用未甲基化的dNTPs进行末端修复，不会在末端引入新的甲基化水平，从而不会引起测得的甲基化水平失真现象。
主权项：1.一种DNA甲基化测序文库的构建方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）、获得目标双链DNA；（2）、采用甲基化保护液将所述目标双链DNA的甲基化胞嘧啶氧化为受保护胞嘧啶，以得到受保护双链DNA；（3）、将所述受保护双链DNA变性为单链DNA；（4）、采用脱氨反应液将所述单链DNA中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，得到转化后单链DNA；（5-1）、采用衔接酶在所述转化后单链DNA的3’端衔接上具有部分双链的截短接头序列，得到单链接头产物；（5-2）、采用DNA聚合酶使所述单链接头产物利用底物dNTP分子以所述截短接头序列为聚合起点沿5’端至3’端的方向聚合成双链DNA，得到双链延伸产物；（5-3）、在所述双链延伸产物的未添加所述截短接头序列的另一端连接上双链接头序列，得到双链接头产物；（5-4）、采用DNA连接酶在所述双链接头产物的5’端添加具有双链结构的测序接头序列以及，进行PCR反应，得到所述DNA甲基化测序文库；所述甲基化保护液包括TET2反应缓冲液、TET2蛋白、氧化补剂、二硫苏糖醇、氧化增强剂；所述脱氨反应液包括APOBEC反应缓冲液、牛血清白蛋白、APOBEC蛋白、无核酸酶水；在步骤（3）中，所述变性的温度为85℃，添加的变性剂为甲酰胺。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 竹石生物科技(苏州)有限公司 DNA甲基化测序文库及其构建方法和检测方法
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