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申请/专利权人：江西农业大学

摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种华泽兰叶片诱导不定芽再生植株的方法，该再生方法以华泽兰无菌实生苗的叶片为外植体，采用直接分化不定芽或经过愈伤组织间接诱导不定芽实现再生的技术，具体包括无菌实生苗的获得，不定芽的诱导，不定芽的增殖及生根，植株的炼苗及移栽。本发明的再生方法通过优化植物生长调节剂的配比，并直接以华泽兰无菌实生苗叶片为外植体，经过直接叶片分化不定芽或叶片诱导的愈伤组织间接诱导不定芽，再进行增殖、生根，可以快速获得扩培优势的华泽兰植株，完好的保留了华泽兰母本优良的遗传特性，为其遗传转化、基因编辑及基因功能方面的研究提供技术支撑。

主权项：1.一种华泽兰叶片诱导不定芽再生植株的方法，其特征在于，以华泽兰无菌实生苗的叶片为外植体，采用直接分化不定芽或经过愈伤组织间接诱导不定芽实现再生的技术，具体包括以下步骤：S1.无菌实生苗的获得：将华泽兰种子进行消毒处理，然后将消毒后的种子接种在MS1培养基上，培养至长出无菌实生苗；所述MS1以MS为基础培养基，还含有浓度为0.1mg·L-1的IBA、0.1mg·L-1的NAA，培养时间为50-70d；S2.不定芽的诱导：取无菌实生苗的叶片切除叶尖0.5-1.0cm，将叶片横切成长度为1cm±0.2cm的片段，平放在叶片诱导不定芽培养基上培养30-50d，得到叶片诱导的不定芽；或，取无菌实生苗的叶片，用无菌解剖刀垂直叶脉横切2-4个伤口后接种到诱导愈伤培养基中，进行愈伤组织初级诱导，获得初级愈伤组织，然后将初级愈伤组织转接到分化诱导培养基中进行诱导培养，得到叶片愈伤组织诱导的不定芽；所述叶片诱导不定芽培养基为MS2，以MS为基础培养基，还含有浓度为3.0mg·L-1的6-BA、0.5mg·L-1的NAA、30g·L-1的蔗糖和6g·L-1的琼脂粉，其pH为5.8-6.0；所述诱导愈伤培养基为MS3，以MS为基础培养基，还含有浓度为2.0mg·L-1的6-BA、浓度为0.2mg·L-1的NAA、浓度为0.2mg·L-1的2,4-D、浓度为30g·L-1的蔗糖和浓度为6g·L-1的琼脂粉，或以MS为基础培养基，还含有浓度为0.2mg·L-1的IBA、浓度为0.5mg·L-1的NAA、浓度为30g·L-1的蔗糖和浓度为6g·L-1的琼脂粉，其pH为5.8-6.0；所述分化诱导培养基为MS4，以MS为基础培养基，还含有浓度为0.3-2.0mg·L-1的6-BA、0.3-2.0mg·L-1的NAA、1.0mg·L-1KT、0.3-0.5mg·L-1的2,4-D、30g·L-1的蔗糖和6g·L-1的琼脂粉，其pH为5.8-6.0;S3.不定芽的增殖及生根：将不定芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，再将增殖培养后的不定芽转接到生根培养基中培养20-30d，得到完整的再生苗；所述增殖培养基为MS5，以MS为基础培养基，还含有浓度为1.0-2.0mg·L-16-BA和0.1mg·L-1NAA；S4.植株的炼苗及移栽：将再生苗炼苗后，洗净根部培养基移栽到基质中进行培养，得到再生植株。

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