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申请/专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;中农科睿生物科技研究有限公司
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及具有噬菌体抗性生产甲基苹果酸的大肠杆菌工程菌株、构建及发酵生产方法。本申请通过筛选在大肠杆菌中调控甲基苹果酸合酶表达的启动子并检测酶活性和产物产量，建立了甲基苹果酸合酶筛选方法。通过敲除噬菌体在宿主菌株中繁殖的关键基因，过表达异源SspBCDE操纵子和甲基苹果酸合酶，构建了具有噬菌体抗性的大肠杆菌工程菌株。在此基础上，提高菌株内乙酰辅酶A的供给并增加其葡萄糖利用能力构建了具有噬菌体抗性的可高产甲基苹果酸的大肠杆菌工程菌株。该工程菌株在发酵罐水平的甲基苹果酸产量可达110.19gL。
主权项：1.一种构建具有噬菌体抗性生产甲基苹果酸的大肠杆菌工程菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：构建具有噬菌体抗性的大肠杆菌工程菌株：包括以下步骤：截掉大肠杆菌外膜铬铁转运体FhuA的Loop8的编码基因，其中，所述大肠杆菌外膜铬铁转运体FhuA的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示，所述Loop8的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示；敲除大肠杆菌中的硫氧还蛋白编码基因trxA，所述大肠杆菌中的硫氧还蛋白编码基因trxA的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示；将来源于大肠杆菌的SspB、SspC、SspD和SspE操纵子分段敲入大肠杆菌基因组中的S9位点，其中，所述SspB、SspC、SspD和SspE操纵子的核苷酸序列分别如SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11和SEQIDNO：12所示，构建Methanococcusjannaschii来源的甲基苹果酸合酶MjCimA3.7的编码基因在启动子PJ23100调控下的大肠杆菌表达载体，其中，所述甲基苹果酸合酶MjCimA3.7的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示，所述启动子PJ23100的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；在大肠杆菌中过表达所述甲基苹果酸合酶MjCimA3.7的编码基因。
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百度查询： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 中农科睿生物科技研究有限公司 具有噬菌体抗性生产甲基苹果酸的大肠杆菌工程菌株、构建及发酵生产方法
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