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申请/专利权人：南昌大学第一附属医院
摘要：本发明公开了一种高毒力耐药肺炎克雷伯菌的检测方法，所述方法包括制备刀豆蛋白A‑磁性纳米粒子复合物；使用所述刀豆蛋白A‑磁性纳米粒子复合物富集肺炎克雷伯菌；将所述目标溶液投入所述RPA反应体系中扩增肺炎克雷伯菌核酸；将所述RPA反应液投入所述CRISPRCas12a检测体系中切割扩增所得核酸，以得到检测溶液；对检测溶液进行检出限判定或荧光检测，输出检测结果。本发明可以在实际临床工作中更快速、特异性地检测目的菌肺炎克雷伯菌核酸，测定效率高、操作简便、检测时间短。
主权项：1.一种高毒力耐药肺炎克雷伯菌的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1、取预设量的磁性纳米粒子与刀豆蛋白A，通过刀豆蛋白A包被磁性纳米粒子，以得到刀豆蛋白A-磁性纳米粒子复合物；S2、将所述刀豆蛋白A-磁性纳米粒子复合物投入待检测样本中，使用所述刀豆蛋白A-磁性纳米粒子复合物富集肺炎克雷伯菌，以得到目标溶液；S3、确定RPA反应体系，将所述目标溶液投入所述RPA反应体系中扩增肺炎克雷伯菌核酸，以得到RPA反应液；S4、确定CRISPRCas12a检测体系，将所述RPA反应液投入所述CRISPRCas12a检测体系中切割扩增所得核酸，以得到检测溶液；S5、将所述检测溶液在多功能酶标仪中检测15分钟，每分钟读1次数，以阴性对照组的荧光值加上3倍标准偏差作为检出限判定检测结果，或者在紫外下观察所述检测溶液的荧光颜色，若为绿色，则所述待检测样本中含有高毒力耐药肺炎克雷伯菌；所述CRISPRCas12a检测体系包括Cas12a蛋白、用于CRISPRCas12a反应的peg-344基因引物、用于CRISPRCas12a反应的kpc-2基因引物、AIEgens荧光探针、AlEgens报道子、双蒸水、反应缓冲液；所述用于CRISPRCas12a反应的peg-344基因引物的序列如SEQIDNO.5所示，所述用于CRISPRCas12a反应的kpc-2基因引物的序列如SEQIDNO.6所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南昌大学第一附属医院 一种高毒力耐药肺炎克雷伯菌的检测方法
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