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一种草鱼GCRV感染模型的建立方法 

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申请/专利权人:中国科学院水生生物研究所

摘要:本发明涉及病毒生物学技术领域,尤其涉及一种草鱼GCRV感染模型的建立方法。本发明提供了一种草鱼GCRV感染模型的建立方法,包括步骤:S1病毒的分型鉴定;S2病毒原液的分离、滴度测定和病毒液的制备;S3实验鱼分组和人工驯食;S4拌病毒饲料的制备;S5人工感染及观察统计。本发明采用拌病毒饲料感染实验鱼的方式,模拟了自然感染途径,避免意外伤害,确保了感染病毒后鱼体表型的准确性。此外,本发明还提供了标准化的病毒摄入剂量测定流程和明晰的判断标准,使得模型的重现性好,实验结果可信度高。本发明的方法适用于大规模病毒人工感染实验,在病毒病防控、抗病新品系培育、病毒疫苗研发等领域具有重要应用价值。

主权项:1.一种草鱼GCRV感染模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:S1采集野外自然感染GCRV的病鱼,迅速在-4℃条件下冻存备用,取病鱼的肠组织,提取RNA,进行反转录获得cDNA,利用GCRV三类亚型的特异性引物进行PCR病毒分型鉴定;S2收集所述病鱼的肌肉和内脏组织样本,称重后按照1:3的重量比加入无菌PBS进行匀浆研磨制得病毒悬液,离心取上清液即获得病毒原液,进行反转录获得cDNA,再采用qPCR检测上清液中的病毒滴度,确定病毒滴度后用PBS稀释从而制得病毒液,冻存于-80℃备用;S3选取体重8-10g、GCRV检测阴性的同一家系的健康草鱼,分成实验组和对照组,分别放入不同的养殖缸,水温控制在26-28℃;人工驯食草鱼7-10天,使草鱼能形成条件反射,主动抢食;S4将所述病毒液28℃复苏2小时后,按重量比1:1比例与草鱼膨化饲料混合均匀从而制得拌病毒饲料;S5实验组的养殖缸内投入拌病毒饲料,而对照组的养殖缸内投入拌PBS饲料,所述拌PBS饲料中的PBS剂量与所述拌病毒饲料中的病毒液的剂量相等;每组均每天投喂2次,观察记录死亡数量和症状,直至所有组别连续7天不再出现死亡个体。

全文数据:

权利要求:

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