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申请/专利权人:郑州大学第一附属医院
摘要:本申请属于细胞提取技术领域,尤其涉及慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的提取、冻存及复苏的方法,包括以下步骤:提取慢性淋巴细胞白血病患者的外周血样本,在室温下离心分离提取慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞,洗涤慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞,重悬慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞,配置慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的细胞混悬液;将预冷的冻存液逐滴加入慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的细胞混悬液,分装至冰上预冷的冻存管中,短期冻存处理后,长期冻存。该方法能够减少操作过程中对CLLB淋巴细胞的损伤及耗损,减少了在操作过程中由于外界刺激导致的细胞损失,保证复苏CLLB淋巴细胞的活性,以用于后续实验。
主权项:1.一种慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的提取、冻存及复苏的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、提取慢性淋巴细胞白血病患者的外周血样本,将外周血样本倒入淋巴细胞分离液中,在室温下离心处理,提取自上而下的第二层,即包含慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的单个核细胞群;S2、加入预热的细胞培养液,洗涤慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞,在室温下离心处理,移除上清液;S3、加入预热的小牛血清,重悬慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞,提取部分液体进行细胞计数,以此推算样本中细胞总数;S4、根据推算结果,再次加入预热的小牛血清,配置为慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的细胞混悬液;S5、将预冷的冻存液逐滴加入慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的细胞混悬液,全程冰上操作并同时摇匀;S6、将加入冻存液的慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞分装至冰上预冷的冻存管中,标记日期及样本编号,全程冰上操作;S7、将提取的慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞短期冻存处理后,长期冻存。
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权利要求:
百度查询: 郑州大学第一附属医院 慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞的提取、冻存及复苏的方法
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