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申请/专利权人：海阳市三丰生化有限公司

摘要：本发明公开了蛋白提取领域的一种提取于鸡软骨的含二型胶原蛋白的软骨粉及制备方法，所述软骨粉包括如下重量份的组分：钙化II型胶原蛋白30‑40份、富离子硫酸软骨素20‑30份、透明质酸10‑20份、维生素C1‑3份、氨基葡萄糖1‑5份；本发明通过DES联产提取法，对鸡软骨中的II型胶原蛋白和硫酸软骨素进行连续提取，能够保留II型胶原蛋白的完整构象，保持II型胶原蛋白活性，同时提高提取效率，并对II型胶原蛋白和硫酸软骨素进行改性，提高II胶原蛋白和硫酸软骨素的作用效果。

主权项：1.一种提取于鸡软骨的含II型胶原蛋白的软骨粉的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、将II型胶原蛋白粉溶解于去离子水中，调节pH至9.3，加入碱性蛋白酶，升高反应温度至50℃，反应4h后，升高温度至90℃灭酶处理15min，离心取上清，干燥得到小分子II型胶原蛋白；S2、将步骤S1中的小分子II型胶原蛋白溶解于去离子水中，调节pH至7，加入谷氨酰胺酶，调节反应温度至50℃，酶解60min，后，升高温度至90℃灭酶10min，离心后取上清，冷冻干燥得到预钙化II型胶原蛋白肽；S3、将步骤S2所制备的预钙化II型胶原蛋白肽溶解于去离子水中，加入CaCl2溶液，反应30min后，4000rpm下离心20min，取上清液透析处理，冷冻干燥后得到钙化II型胶原蛋白；所述预钙化II型胶原蛋白肽在去离子水中的质量分数为10-12%；所述CaCl2溶液的质量浓度为60gL，所述预钙化II型胶原蛋白与CaCl2之间的质量比为1:3-4S4、将硫酸软骨素粉溶解于去离子水中，调节pH至9，按照体积比1:1加入金属离子混合溶液，金属离子混合溶液中氯化锌的质量浓度为4gL，氯化锶的质量浓度为2gL，升高反应温度至50℃，反应90-120min后，加入体积分数为95%乙醇溶液，进行醇沉，过滤，将沉淀置于37℃烘箱中烘干，得到富离子硫酸软骨素；S5、将钙化II型胶原蛋白、富离子硫酸软骨素溶解于去离子水中，加入氨基葡萄糖、透明质酸、维生素C，升高温度至50-60℃，搅拌1-2h，待反应体系冷却至室温后，冷冻干燥，得到软骨粉；所述软骨粉包括如下重量份的组分：钙化II型胶原蛋白30-40份、富离子硫酸软骨素20-30份、透明质酸10-20份、维生素C1-3份、氨基葡萄糖1-5份；所述II型胶原蛋白粉和硫酸软骨素采用DES联产方法进行提取，具体提取方法包括如下步骤：①、取新鲜鸡软骨切段，以40℃烘干至恒重，用钢磨打碎呈粉末状，过40目筛，得到鸡软骨粉；②、将苄基三丁基溴化铵和柠檬酸置于烧杯中按照80rpm速度进行匀速搅拌，升高反应温度至70℃，逐滴加入去离子水形成均一透明的溶液，冷却后得到胶原蛋白提取液；③、将步骤①所制备的鸡软骨粉置于烧杯中，加入步骤②所制备的胶原蛋白提取液，置于40℃水浴中进行搅拌反应4h后，置于10000rpm下离心15min，分离上清液和沉淀，将沉淀用去离子水进行洗涤，干燥后，以待备用，取上清液加入无水乙醇静置过夜后，以5000rpm离心15min，去上清，用去离子水重悬洗涤，冷冻干燥，得到II型胶原蛋白粉；④、将氯化胆碱和尿素进行混合，按照120rpm速度匀速搅拌，升高反应温度至80℃，逐滴加入去离子水直至溶液澄清透明，冷却得到硫酸软骨素提取液；⑤、将步骤③中沉淀置于烧杯中，加入步骤④所制备的硫酸软骨素提取液，置于100℃下进行持续搅拌反应，2h后，在5000rpm下离心30min，收集上清液，加入无水乙醇静置过夜，10000rpm离心10min，取沉淀用去离子重悬，置于10kDa透析袋中，4℃透析2d，冷冻干燥，得到硫酸软骨素。

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