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申请/专利权人：江苏立维斯德生物技术有限公司;立维斯德生物技术(上海)有限公司

摘要：本发明公开了一种转瓶用微载体悬浮培养Vero细胞接种轮状病毒的方法，包括下述步骤：A、微载体前处理；B、Vero细胞的培养；C、微载体悬浮培养繁殖轮状病毒。本发明通过微载体悬浮培养技术显著提升了轮状病毒的生产效率和稳定性，优化了微载体表面处理和Vero细胞的培养条件，确保了病毒培养的高效率、安全性和可靠性，为轮状病毒研究和应用提供了高质量的病毒样本。

主权项：1.一种转瓶用微载体悬浮培养Vero细胞接种轮状病毒的方法，其特征在于，包括下述步骤：A、微载体前处理：A1、微载体激活：用DPBS溶液将微载体水合，进行激活；A2、微载体洗涤：用DPBS溶液洗涤；A3、微载体灭菌：对微载体进行水蒸气灭菌；A4、微载体润洗：用DMEM培养基溶液润洗；A5、微载体重悬：用DMEM培养基溶液重悬，得到微载体重悬液；B、Vero细胞的培养：B1、Vero细胞的复苏：用细胞复苏液对Vero细胞进行复苏；B2、Vero细胞的传代：B21、通过消化液处理实现细胞脱落、收集并转移至新培养瓶中继续培养；B22、通过消化液处理、添加细胞生长液实现消化和重新悬浮过程，实现细胞的扩增和均匀分配至新的培养瓶中继续培养；B3、Vero细胞的收获：通过消化液处理和细胞悬浮技术，完成Vero细胞的收集和均匀分配；B4、收获的Vero细胞计数：通过细胞计数仪进行Vero细胞计数；B5、转瓶接种培养Vero细胞：在转瓶中通过细胞生长液和微载体重悬液处理，Vero细胞经培养后，在微载体上生长并形成致密单层；C、微载体悬浮培养繁殖轮状病毒：C1、病毒激活处理：通过添加TPCK胰酶母液和金属离子化合物液，实现病毒液的激活；C2、清洗Vero细胞：使用DPBS和DMEM溶液清洗Vero细胞；C3、病毒吸附与培养：Vero细胞中加入病毒液进行吸附，加入病毒生长液进行培养；C4、轮状病毒液收获：收集处理和冷冻保存获得轮状病毒液；所述金属离子化合物液包含氯化钙和氯化镁，以及谷胱甘肽或海美溴铵，其中病毒激活处理时，控制氯化钙终浓度为0.25-0.75gL、氯化镁终浓度为0.25-0.75gL，谷胱甘肽或海美溴铵终浓度为0.5mM-1.5mM。

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