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申请/专利权人：瑞泽恩制药公司

摘要：本发明提供了用于修饰细胞中的一个或多个靶基因座的方法和组合物。此类方法包括提供包含第一多核苷酸的细胞，所述第一多核苷酸编码第一选择标记并有效连接至所述细胞中有活性的第一启动子，其中所述第一多核苷酸还包含第一核酸酶试剂的第一识别位点。向细胞中引入第一核酸酶试剂，其中所述第一核酸酶试剂在所述第一识别位点处诱导切口或双链断裂。进一步向细胞中引入包含第一插入多核苷酸的第一靶向载体，所述第一插入多核苷酸侧接第一同源臂和第二同源臂，所述第一同源臂和第二同源臂与位于足够接近第一识别位点处的第一靶位点和第二靶位点相对应。然后鉴定在其基因组中包含在所述靶基因座处整合的所述第一插入多核苷酸的至少一个细胞。

主权项：1.一种用于非治疗目的的连续修饰细胞中的靶基因座的方法，包括：a提供包含所述靶基因座的所述细胞，其中所述靶基因座包含第一选择盒，所述第一选择盒包含：1编码第一选择标记并可操控地连接至第一启动子的第一多核苷酸，和2第一核酸酶试剂的第一核酸酶识别位点，所述第一核酸酶识别位点位于所述第一选择标记的编码区或所述第一选择标记的任意非蛋白编码区；b向所述细胞中引入：i所述第一核酸酶试剂或编码所述第一核酸酶试剂的多核苷酸，其中所述第一核酸酶试剂在所述第一核酸酶识别位点处诱导切口或双链断裂；和ii包含第一插入多核苷酸的第一靶向载体，所述第一插入多核苷酸侧接与位于所述靶基因座的第一同源臂靶位点相对应的第一同源臂以及与位于所述靶基因座的第二同源臂靶位点相对应的第二同源臂，其中所述第一插入多核苷酸包括第二选择盒，所述第二选择盒包含：1编码第二选择标记并可操控地连接至第二启动子的核苷酸，和2第二核酸酶试剂的第二核酸酶识别位点，其中所述第一选择标记和所述第二选择标记不同，其中所述第一核酸酶试剂和所述第二核酸酶试剂不同，其中所述第一核酸酶试剂和所述第二核酸酶试剂分别为转录激活因子样效应物核酸酶TALEN对、锌指核酸酶ZFN对、或成簇规律间隔短回文重复序列CRISPR相关Cas蛋白和向导RNAgRNA，以及其中所述第二核酸酶识别位点位于所述第二选择标记的编码区或所述第二选择标记的任意非蛋白编码区，其中所述第一靶向载体是至少10kb的大靶向载体，和其中步骤a中的所述第一选择盒侧接所述第一同源臂靶位点和所述第二同源臂靶位点；以及c鉴定在所述靶基因座处包含所述第一插入多核苷酸的修饰细胞，其中所述修饰细胞具有所述第二选择标记的活性，但不具有所述第一选择标记的活性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 瑞泽恩制药公司 用于修饰所靶向基因座的方法和组合物