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申请/专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
摘要：本发明公开了一种基于CRISPRCas12a的多靶点编辑糖基化酶基因的方法。所述方法针对6种糖基化酶基因设计特异性crRNA并以array形式排列，并构建含有所述crRNA和Cas12a编码基因的慢病毒复合质粒，与病毒包装质粒包装为重组病毒并转染靶细胞对相应的糖基化酶基因进行基因编辑。通过本发明的方法，可以实现对CHO细胞中6种糖基化酶的同时敲除，有效避免多种糖基化酶对生物药物质量的潜在影响。由于本发明的方法具有高度的特异性和精确性，可以最大限度地避免对其他基因的干扰，保证了细胞的稳定性和安全性。
主权项：1.一种基于CRISPRCas12a的多靶点编辑糖基化酶基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）将分别靶向fut8、Mgat4a、Mgat4b、Mgat5、St3gal4和St3gal6基因的6个crRNA以array形式排列形成的序列如SEQIDNO.1所示的DNA分子正义链，和与其序列互补的序列如SEQIDNO.2所示的反义链形成互补的双链DNA分子；（2）将步骤（1）获得的双链DNA分子与含有Cas12a编码基因的质粒构建包含6个crRNA和Cas12a蛋白编码基因的复合质粒；（3）将步骤（2）获得的复合质粒与病毒包装质粒共转染宿主细胞包装为重组病毒并收集细胞培养液获得重组病毒；（4）经步骤（3）获得的重组病毒转染入待糖基化酶基因编辑的靶细胞进行基因编辑；（5）鉴定并收获糖基化酶基因被编辑的靶细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种基于CRISPR/Cas12a的多靶点编辑糖基化酶基因的方法
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