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申请/专利权人：郑州伊美诺生物技术有限公司
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种重组鲎试剂及其制备方法、应用。本发明通过利用昆虫杆状病毒表达系统和蛋白稳定剂的获得了高活性的重组鲎三因子凝固酶原、B和C因子，用于检测细菌内毒素。该方法可以排除G因子旁路干扰，从而有效地避免了葡聚糖产生假阳性的可能性，同时解决天然鲎试剂资源匮乏问题；重组鲎试剂可采用终点比色法，简化检测模式，在常规酶标仪完成检测；利用级联反应，减少样本使用量、提升检测灵敏度；优化后检测时间缩短至20min，大大提升检测效率；可作为一种新型、快速的内毒素检测试剂。
主权项：1.一种重组鲎试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将编码鲎C因子、B因子、凝固酶原的基因片段分别与杆状病毒表达载体连接、转化，经提取分别获得重组质粒1～3；步骤2：将所述重组质粒1～3分别感染昆虫细胞，培养，收集培养上清液，分别获得重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子；步骤3：将重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子与无热源Tris缓冲液、鲎三肽底物、无内毒素水混合，得到重组鲎试剂；步骤2中在所述感染之后还包括添加蛋白稳定剂的步骤；所述蛋白稳定剂由蛋白酶类抑制剂和氨基酸类稳定剂组成；所述蛋白酶类抑制剂包括丝氨酸蛋白酶类抑制剂，所述氨基酸类稳定剂包括中性氨基酸和或碱性氨基酸。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 郑州伊美诺生物技术有限公司 一种重组鲎试剂及其制备方法、应用
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