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申请/专利权人:吉林大学
摘要:本发明公开了基于EXPAR‑CRISPRCas12a检测微生物的试剂盒及其检测方法,属于分子生物学技术领域,建立了一种信号转化探针结合EXPAR‑CRISPRCas12a融合体系信号转化探针可在无需提取遗传物质的情况下,将肠炎沙门氏菌的菌信号转化成核酸分子信号,避免了在样本处理过程中产生DNA污染,并大大减少了检测时间。EXPAR‑CRISPRCas12a融合体系将核酸分子信号进行快速放大和转化,避免了EXPAR扩增结果的假阳性并简化了操作步骤,为检测结果具有响应速度快、灵敏度高、可视性和检出限低等优点提供了保障。LOD为36.3CFUmL,检测时间少于1小时。
主权项:1.EXPAR-CRISPR融合体系,包括:0.8-1.2×NE缓冲液、600-700μMdNTP、1.6-2.4UμLNt.BbvCI、0.5-1.3UμLKlenowFragment3'-5'exo-polymerase、100-110mMTris-HCL、1.5-2.5μMRNP、5-15μM报告探针和去核酸酶水;所述的RNP为:将5μL10×NE2.1、0.5μL2.0μMEnGen®LbaCas12a和1.5μL3μMgRNA、43μL去核酸酶水混合,37℃共孵育30分钟,制得。
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权利要求:
百度查询: 吉林大学 基于EXPAR-CRISPR/Cas12a检测微生物的试剂盒及其检测方法
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