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申请/专利权人：辽宁省农业科学院

摘要：本发明公开了一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法，步骤如下：1对成熟的高粱种子进行消毒处理；2制备愈伤诱导培养基：3将经过步骤1处理的高粱种子均匀播种到步骤2得到的含有愈伤诱导培养基的培养皿上；4将经过步骤3处理的培养皿封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h8h连续培养6～8周后得到胚性愈伤；5制备分化培养基；6分化培养；7制备生根培养基；8生根培养；9将步骤8接种后的培养瓶封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h8h，连续培养4～6周后可生根，根壮后移栽到土壤中，完成生活史。

主权项：1.一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法，其特征在于，步骤如下：1对成熟的高粱种子进行消毒处理；2制备愈伤诱导培养基：21分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水，搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；22将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌10～60分钟后，冷却至RT～75℃，然后向其中加入适量2，4-D母液，调节2，4-D的浓度至6～10mgL；23然后再向其中加入CuSO4母液，调节CuSO4的浓度在0.5～2μmolL，摇匀后倒板，将20～30ml的培养液倒入培养皿中，在超净工作台上冷凝后得到含有愈伤诱导培养基的培养皿；3将经过步骤1处理的高粱种子均匀播种到步骤2得到的含有愈伤诱导培养基的培养皿上，其中：高粱种子胚面朝下，播种密度控制在10～30粒培养皿；4将经过步骤3处理的培养皿封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h8h连续培养6～8周后得到胚性愈伤；5制备分化培养基：51分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水，搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；52将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌后10～60分钟后，冷却至RT～75℃；53向混合液中加入适量IAA母液，调节IAA的浓度至1～5mgL；54向混合液中加入BAP母液，调节BAP的浓度至1～5mgL；55向混合液中加入CuSO4母液，调节CuSO4的浓度至0.5～2μmolL，摇匀后得到培养液，倒板，每20～30ml培养液倒入透气玻璃培养瓶中，在超净工作台上冷凝后得到含有分化培养基的培养瓶；6分化培养：61将步骤4诱导的得到的胚性愈伤接种到步骤5得到的含有分化培养基的培养瓶；62将接种后的培养瓶封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h8h连续培养4～8周后，胚性愈伤可见完整的主茎；7制备生根培养基：71分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；72将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌10～60分钟后，冷却至RT～75℃；73向混合液中加入NAA母液，调节NAA的浓度至0.5～2mgL；74向混合液中加入IAA母液，调节IAA的浓度至0.5～2mgL；75向混合液中加入IBA母液，调节IBA的浓度至0.5～2mgL；76向混合液中加入CuSO4母液，调节CuSO4的浓度至0.5～2μmolL，摇匀后得到培养液，倒板，每20～30ml培养液倒入透气玻璃培养瓶中，在超净工作台上冷凝后得到含有生根培养基的培养瓶；8生根培养：将步骤6诱导得到的胚性愈伤的主茎切下，弃去剩余愈伤组织，接种到步骤7得到的含有生根培养基的培养瓶上，其中：每个培养瓶只接种一个主茎；9将步骤8接种后的培养瓶封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h8h，连续培养4～6周后可生根，根壮后移栽到土壤中，完成生活史，其中：步骤6中，在接种之前，需要将待接种的胚性愈伤夹碎或者捣开；步骤1包括以下步骤：11取成熟的高粱种子10～20ml，放置于50ml的离心管中，然后向离心管中滴加1～3滴的表面活性剂，然后再加入适量的75％vv的乙醇，填满所述离心管，盖紧盖子；12将所述离心管在振荡器上以60～100rpm的转速震荡消毒30～60分钟，完成后弃去液体；13向所述离心管加入适量2％vv的巴氏消毒液，以60～100rpm的转速震荡消毒2～4小时，弃去液体后，再用高压灭菌超纯水洗涤至少三次后得到处理后的高粱种子；步骤8中切下的主茎的长度在2cm以上。

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