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申请/专利权人：吉林农业科技学院

摘要：本发明属于医药领域，涉及落叶松中阿拉伯半乳聚糖及其衍生物的制备方法与应用；其中，落叶松中阿拉伯半乳聚糖衍生物为硫酸化阿拉伯半乳聚糖，所述硫酸化阿拉伯半乳聚糖可以在制备治疗炎症性肠病或结肠癌的药物中应用；硫酸化阿拉伯半乳聚糖主要是通过激活AMPK‑mTOR信号通路进一步调控NCOA4介导的铁蛋白自噬以及增加LimosilactobacillusreuteristrainHDB1243和Lactobacillusjohnsoniistrain1696相对丰度拮抗结肠癌，为结肠癌的治疗提供新的手段。

主权项：1.落叶松中阿拉伯半乳聚糖衍生物的制备方法，所述方法是以落叶松中阿拉伯半乳聚糖为原料，经硫酸化改性得到；其特征在于，所述落叶松中阿拉伯半乳聚糖的制备方法包括以下步骤：（1）将落叶松根粉末加入到烧杯内，加入无水乙醇进行脱脂，经过滤风干后，将粉末干燥并用蒸馏水在60-80℃下超声辅助提取，合并上清液并浓缩；向浓缩溶液中加入无水乙醇直至乙醇浓度达到90%，静置过夜，通过离心收集沉淀；将沉淀重溶解于蒸馏水中，加入Sevage试剂去除蛋白质，通过透析和冻干得到粗多糖；（2）称取粗多糖，加入蒸馏水使其充分溶解，向溶液中加入无水乙醇至溶液的醇浓度达到40%，放置过夜，离心，得到沉淀物AG-40；（3）称取AG-40样品，用蒸馏水定容，采用DEAE纤维素柱层析，用NaCl溶液进行洗脱，获得AG-40-I，将获得的组分浓缩、透析和冻干；（4）称取AG-40-I样品，用蒸馏水定容，采用葡聚糖凝胶柱层析，用NaCl溶液进行洗脱，得到最终组分AG-40-I-II，所述AG-40-I-II是分子量为16.8kDa的均一多糖，主要由摩尔比为12.5:1:0.05的半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成，其为中性多糖，是以→3-β-Gal-1→3和→4-β-Glc-1→4为主链，β-Araf-1→为侧链的AG-Ⅱ型多糖；所述硫酸化改性的方法为氯磺酸-吡啶法，包括以下步骤：（1）将AG-40-I-II样品加入DMF中，室温搅拌使其完全溶解；（2）量取无水吡啶，冰水浴冷却，逐滴加入氯磺酸，得到浅黄色的酯化试剂；（3）将多糖DMF溶液加入到酯化试剂，在50℃下反应1h，加入2.5molL的NaOH溶液中和，调节pH至7.0；加入无水乙醇使多糖沉淀，离心收集沉淀，透析后冻干，获取硫酸化阿拉伯半乳聚糖粗品；（4）对获取的硫酸化阿拉伯半乳聚糖粗品用Superose12葡聚糖凝胶柱进行纯化，收集含量最高组分即可，纯化后的硫酸化阿拉伯半乳聚糖是分子量为17.9kDa的均一多糖，主要由摩尔比为6.7:1:0.3的半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成。

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