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一种提高甘野菊CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法 

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申请/专利权人:南京农业大学

摘要:本发明公开了一种提高甘野菊CRISPRCas9基因编辑效率的方法,属于基因工程技术领域。本发明公开的提高甘野菊CRISPRCas9基因编辑效率的方法,选择携带有CRISPRCas9表达盒,但是目的基因未被完全编辑的甘野菊茎段为材料,进行37℃30h、22℃42h,3个循环的热激处理,提高茎段再生芽中靶基因编辑效率。结果表明,NRPD1基因编辑率为0的株系经过热激循环处理后,15株材料均有1%~55%不等比例的基因编辑效率提升。基因编辑率为0的株系经过热激循环处理后,提高了CsDRM1的编辑效率,最高基因编辑率达到100%。

主权项:1.甘野菊NRPD1基因的CRISPRCas9编辑系统的构建方法,其特征在于,步骤包括:1设计甘野菊NRPD1基因的sgRNA靶序列;2构建表达盒AtU6promoter-sgRNA-AtU6terminator-AtU6promoter-sgRNA-AtU6terminator;3将表达盒与骨架载体连接,构建基因编辑载体,即得到甘野菊NRPD1基因的CRISPRCas9编辑系统。

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权利要求:

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