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申请/专利权人:四川农业大学
摘要:本发明涉及植物技术领域,且公开了一种象草高效原生质体分离系统,包括以下步骤:S1:选取12Hoagland水培象草茎节,培育两周左右周期第二片展开叶,用刀片将的叶横向切成条,用组合酶将象草叶片酶解成原生质体,对酶解液预制溶液浓度进行筛选,一旦切下叶条,立即将叶条浸入酶解液预制溶液不同浓度中,轻轻晃动,使其完全浸没;S2:将叶条在黑暗中以40rpm、28℃在黑暗中进行酶解约3h,此时叶片由于原生质体解离只剩一层膜,用移液管尖端轻轻接触时叶条容易分离;S3:将反应液通过70μm过滤膜过滤,残余物用10mlW5溶液洗涤两次即得到象草叶片的原生质体,实现了象草原生质体的分离。本发明采用的系统可以产生大量高活性原生质体,这可以显著提高转化效率。
主权项:1.一种象草高效原生质体分离系统,其特征在于:包括以下步骤:S1:选取12Hoagland水培象草茎节,培育两周左右周期,取材选取第二片展开叶,用新刀片将叶横向切成条,去弃叶片尖端,用组合酶将象草叶片酶解成原生质体,约0.5g叶片5ml酶解液,对酶解液预制甘露醇溶液浓度进行筛选,一旦切下叶条,立即将叶条浸入酶解液预制溶液不同浓度中,轻轻晃动,使其完全浸没;S2:将叶条在黑暗中以40rpm、28℃在黑暗中进行酶解约3h,此时叶片由于原生质体解离只剩一层膜,用移液管尖端轻轻接触时叶条容易分离;S3:将反应液通过70μm过滤膜过滤,残余物用10mlW5溶液洗涤两次即得到象草叶片的原生质体,实现了象草原生质体的分离。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 四川农业大学 一种象草高效原生质体分离系统及应用
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