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申请/专利权人：复旦大学

摘要：本发明属于生化分析与药物筛选技术领域。涉及用于铀促排药物体外筛选的方法，尤其涉及一种基于竞争酶联免疫吸附试验ELISA测定促排药物与金属硫蛋白MT12竞争结合UVI或Zn2+作用的方法，本方法中，将抗原金属硫蛋白MT12包被在96孔酶标板上，经封闭、UVI或Zn2+处理、螯合剂处理、特异性MT12单克隆抗体一抗与包被抗原结合、酶标二抗与一抗结合、酶反应底物显色及终止反应后，用酶标仪测定吸光度值，通过对药物无药物处理体系的吸光度值变化情况的统计分析，评价螯合剂竞争结合MT12上UVI和Zn2+的能力强弱。本发明方法具有简便、快速和高通量的优势。

主权项：1.一种用于铀UVI促排药物体外筛选的竞争酶联免疫吸附测定方法，其特征在于：包括其促排效果的筛选及其对Zn2+稳态影响的筛选：将MT12抗原包被在酶标板上；4℃孵育过夜后用含1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液封闭；洗板后加入一定浓度的UVI溶液或Zn2+溶液，37°C孵育后洗板；加入一定浓度的螯合剂，37°C孵育后洗板；加入特异性MT12单克隆抗体，37°C孵育后洗板；加入酶标二抗，37°C孵育后洗板；加入酶反应底物OPD，室温避光孵育后加入终止反应液2molL硫酸终止反应，然后用酶标仪在490nm处测定吸光度值；通过下述步骤进行：（1）包被：用包被缓冲液溶解及稀释包被抗原兔肝MT12至工作浓度，加入96孔酶标板中，100μL孔，4℃包被过夜，所述缓冲液为碳酸盐缓冲液；（2）洗板：以PBST为洗液，洗板3次，每次5min，300μL孔，弃液拍干；（3）封闭：以1%牛血清白蛋白为封闭液，200μL孔，4℃封闭过夜；封闭结束后，弃液拍干；（4）UVI或Zn2+处理：加入UVI溶液和Zn2+溶液，100μL孔，37°C孵育3h；（5）洗板：同步骤（2）；（6）螯合剂处理：加入螯合剂，100μL孔，37°C孵育0.5~3h；（7）洗板：同步骤（2）；（8）加一抗：加入一抗鼠抗MT12单克隆抗体，100μL孔，37°C孵育1~3h；（9）洗板：同步骤（2）；（10）加酶标二抗：加入1:1000~2000倍稀释的二抗羊抗鼠IgG-HRP，100μL孔，37℃孵育1h；（11）洗板：同步骤（2）；（12）显色：加入新鲜配制的OPD底物显色液，100μL孔，室温避光显色15min；（13）终止反应：加2molLH2SO4溶液终止显色反应，50μL孔；（14）测定：于酶标仪490nm波长处测定吸光度值A490。

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