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申请/专利权人：西北妇女儿童医院(陕西省妇幼保健院)(陕西省计划生育研究所)

摘要：本发明公开了一种基于胚胎培养液中特异糖链含量检测的囊胚质量评价方法，该方法为：将需要质量判断的胚胎在胚胎培养皿中进行胚胎培养，在胚胎发育到囊胚阶段后转移；在转移囊胚后的培养液滴中加入蛋白酶抑制剂混合，制成的待测样品加入到384孔板中，并加入点样液，制成的待点样样品点到芯片上，在湿盒中放置后烘干；烘干后的芯片进行荧光标记七种特定凝集素孵育，制成凝集素芯片；对每张凝集素芯片均进行荧光检测，得到每张凝集素芯片上每个微滴的荧光强度，代表每个微滴中特定糖链的含量，根据标准含量进行评价。本发明利用凝集素芯片及其他方法检测囊胚培养液中上述七种凝集素对应糖链含量，从而对囊胚质量进行评价及筛选高质量囊胚进行移植。

主权项：1.一种基于胚胎培养液中特异糖链含量检测的囊胚质量评价方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、将需要质量判断的胚胎放置在胚胎培养皿的培养液滴中进行胚胎培养，在胚胎发育到囊胚阶段即受精后第5～6天时，将囊胚转移到另一个胚胎培养皿的培养液滴中；S2、将S1中转移走囊胚后的胚胎培养皿内的培养液滴吸取至样品管中，并在样品管中加入蛋白酶抑制剂后，混合均匀制成待测样品；S3、将S2中制成的待测样品加入到384孔板中，384孔板的每个孔对应一样品管待测样品，并在每个孔中加入点样液后，混合均匀制成待点样样品；S4、通过点样仪将S3中384孔板的孔内的待点样样品点到芯片上，每个孔内的待点样样品至少点7张芯片，将点好样的芯片在室温下的湿盒中放置1.5～2.5小时后，再放到温度为37℃的烘箱中烘干，得到烘干后的芯片；S5、将S4中得到的烘干后的芯片进行荧光标记特定凝集素孵育，制成凝集素芯片；每个胚胎至少对应7张烘干后的芯片，每张烘干后的芯片上孵育一种特定凝集素，共孵育七种特定凝集素，所述七种特定凝集素分别为：BPL、DBA、GNA、LCA、MAL-I、NPA和UEA-I；所述荧光标记特定凝集素孵育的方法为：将所述烘干后的芯片放到混合液A中进行清洗，清洗2次后，再放到10mM磷酸盐缓冲液中再次清洗2次，然后离心甩干芯片；在甩干的芯片上滴加封闭缓冲液，然后在温度为30℃的条件下孵育1小时，再依次进行清洗和甩干；在二次甩干的芯片上滴加混合液B稀释过的荧光标记特定凝集素，在温度为30℃的条件下孵育3小时，再依次进行清洗和甩干；S6、用芯片扫描仪对S5中制成的每张凝集素芯片分别进行荧光检测，得到每张凝集素芯片上的每个微滴的荧光强度，代表每个微滴中特定糖链的含量；将得到的每个囊胚的七种特定凝集素的荧光强度分别与标准含量进行比较，符合GNA、LCA、MAL-I、NPA和UEA-I五种特定凝集素的荧光强度高于标准含量和BPL、DBA两种特定凝集素的荧光强度低于标准含量的规则的囊胚发育质量越高；七种特定凝集素的标准含量为：GNA的荧光强度770，LCA的荧光强度1107，MAL-I的荧光强度4635，NPA的荧光强度152，UEA-I的荧光强度91，BPL的荧光强度＜5604、DBA的荧光强度＜538；囊胚质量高低排序：七种特定凝集素的荧光强度均符合上述规则的囊胚六种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚五种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚四种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚三种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚两种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚一种特定凝集素的荧光强度符合上述规则的囊胚七种特定凝集素的荧光强度均不符合上述规则。

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