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申请/专利权人：山东大学
摘要：本发明涉及一种可对里氏木霉基因组进行多靶点和可迭代编辑的CRISPRCas9系统及应用。所述CRISPRCas9系统包括CRISPRCas9基因编辑载体和供体DNA；所述供体DNA由里氏木霉待编辑的靶点基因的上下游同源臂组成。所述CRISPRCas9基因编辑载体包括基因编辑质粒pTCU和sgRNA表达盒。本发明提供的基因编辑载体利用基于AMA1自主复制序列的质粒表达Cas9和sgRNA实现基因编辑后Cas9基因表达盒的消除，避免Cas9蛋白表达的毒性降低里氏木霉纤维素酶的表达。利用本发明构建的pTCU质粒进行基因组编辑之后，实现Cas9基因表达盒的消除之后，里氏木霉菌株的纤维二糖水解酶活性未受显著影响，而基因组表达Cas9会使里氏木霉菌株的纤维二糖水解酶活性降低96.2％。
主权项：1.一种可对里氏木霉基因组进行多靶点和可迭代编辑的CRISPRCas9基因编辑载体，其特征在于，所述CRISPRCas9基因编辑载体包括基因编辑质粒pTCU和sgRNA表达盒；所述基因编辑质粒pTCU由带有AMA1序列、氨苄抗性基因与复制原点序列的载体骨架、Ptcu1-Cas9-Tpdc基因片段和筛选标记基因pyrG组成；所述sgRNA表达盒由RNA聚合酶Ⅲ型启动子和若干个内源性tRNA组成。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东大学 一种可对里氏木霉基因组进行多靶点和可迭代编辑的CRISPR/Cas9系统及应用
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