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一种大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体及基因编辑方法 

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申请/专利权人:中国农业科学院作物科学研究所

摘要:本发明公开了一种大豆CRISPRCas9基因编辑载体及基因编辑方法,涉及植物分子生物学领域,其技术方案要点是:包括设计两个sgRNA,并利用CRISPRCAS9基因编辑技术通过同时编辑GmBADH1和GmBADH2基因,构建了两个单基因编辑载体和一个双基因编辑载体,成功获得了3个GmBADH1单基因编辑株系、3个GmBADH2单基因编辑株系以及3个双基因编辑株系,获得了具有芳香表型的基因编辑突变体,创制了四种新的功能等位基因。本发明可以实现对大豆中目标基因的精确编辑,最小化对非靶基因的影响,提高编辑效率和准确性,并为香味育种提供遗传材料。

主权项:1.一种大豆CRISPRCas9基因编辑载体,其特征是:所述载体以pBSE401质粒为骨架载体,还包括依次连接的大豆内源U6启动子、sgRNA和大豆偏好密码子优化的Cas9蛋白的编码基因zCas9;所述sgRNA为在大豆同源基因GmBADH1和GmBADH2的第一外显子上设计的sgRNA;所述GmBADH1的靶点序列为sgRNA-BADH1,其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述GmBADH2的靶点序列为sgRNA-BADH2,其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。

全文数据:

权利要求:

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