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申请/专利权人：上海元戊医学技术有限公司

摘要：本发明公开了通过神经嵴细胞系制备间充质干细胞的方法及作为骨关节炎药物的应用，涉及技术领域生物医药技术领域，方法包括：S1：人多能干细胞诱导形成神经嵴细胞；向人多能干细胞中加入特异性神经嵴细胞诱导分化培养基培养，并向特异性神经嵴细胞诱导分化培养基中加入YAP激活剂；S2：神经嵴细胞扩增培养；S3：扩增培养后的神经嵴细胞向间充质干细胞分化。本发明的间充质干细胞表达CD90、CD73和CD105，不表达CD14、CD34、CD45和HLA‑DR。本发明的神经嵴细胞表达P75、SOX10和AP2，不表达PAX6和SOX1。本发明还公开了通过神经嵴细胞系制备的间充质干细胞作为骨关节炎药物的应用。

主权项：1.通过神经嵴细胞系制备间充质干细胞的方法，其特征在于,包含以下步骤：S1：人多能干细胞诱导形成神经嵴细胞：向人多能干细胞加入特异性神经嵴细胞诱导分化培养基培养，并向特异性神经嵴细胞诱导分化培养基中加入YAP激活剂；其中所述人多能干细胞为商业化人胚胎干细胞系或人诱导型多能干细胞；所述S1步骤为：将人多能干细胞的上清液吸除，加入所述特异性神经嵴细胞诱导分化培养基培养10天，并向所述特异性神经嵴细胞诱导分化培养基中依次加入如下信号通路调节剂：浓度为100nM-1μM的LDN193189第0-2天，浓度为2μM-20μM的SB431542第0-3天，浓度为1μM-5μM的CHIR99021第3-6天和浓度为2μM-20μM的PY-60第6-10天；所述特异性神经嵴细胞诱导分化培养基由以下成分组成：DMEMF12培养基、浓度为64mgL的左旋抗坏血酸、浓度为14μgL的亚硒酸钠、浓度为10.7mgL的转铁蛋白、浓度为543mgL的碳酸氢钠、浓度为19.4mgL的胰岛素、浓度为100μgL的成纤维生长因子2、浓度为2μgL的转录生长因子β-3；S2：扩增培养该神经嵴细胞；所述步骤S2为：将所述特异性神经嵴细胞诱导分化培养基吸除，加入神经嵴细胞扩增培养基进行扩增培养7天，并向扩增培养基中添加浓度为2-20ngmL的bFGF、浓度为5-50ngmL的EGF和浓度为2μM-20μM的SB431542；所述的神经嵴细胞扩增培养基由以下成分组成:DMEMF12培养基、浓度为64mgL的左旋抗坏血酸、浓度为14μgL的亚硒酸钠、浓度为10.7mgL的转铁蛋白、浓度为543mgL的碳酸氢钠、浓度为19.4mgL的胰岛素、浓度为100μgL的成纤维生长因子2、浓度为2μgL的转录生长因子β-3；S3：扩增培养后的该神经嵴细胞向该间充质干细胞分化，所述步骤S3为：将神经嵴细胞扩增培养基吸除，加入特异性间充质干细胞分化培养基重悬，贴壁培养7天，诱导分化成间充质干细胞；所述的特异性间充质干细胞分化培养基由以下成分组成：最小必须培养基alpha-MEM，5％血清替代物，5ngmL碱性成纤维细胞生长因子和1％抗生素。

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