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申请/专利权人：上海天昊生物科技有限公司
摘要：本发明公开了基于梯度内参的宏基因组绝对定量的方法及应用，方法包括：构建标准内参体系：以如序列SEQIDNO.1‑SEQIDNO.9所示内参基因经扩增后的质粒标记为RCA_BSI1、RCA_BSI2、RCA_BSI3、RCA_BSI4、RCA_BSI5、RCA_BSI6、RCA_BSI7、RCA_BSI8、RCA_BSI9，并在缓冲液中形成具有梯度浓度的标准体系；构建测序文库：将样本提取全部DNA，确定其具有浓度一致性和完整度后，适量加入所述标准内参体系，打断DNA至适当长度范围，至少经末端修复补齐、加A、连接接头、片段长度分选，再PCR扩增获得测序文库，对所述测序文库进行测序获得PE150测序数据；构建RCA标准曲线：测序数据与所述质粒序列比对提取数据，绘制标准曲线，并获得线性方程；依据线性方程，计算样本目标对应的绝对拷贝数。
主权项：1.一种基于梯度内参的宏基因组绝对定量的方法，包括：构建标准内参体系：以如序列SEQIDNO.1-SEQIDNO.9所示内参基因经扩增后的质粒标记为RCA_BSI1、RCA_BSI2、RCA_BSI3、RCA_BSI4、RCA_BSI5、RCA_BSI6、RCA_BSI7、RCA_BSI8、RCA_BSI9，并在缓冲液中形成具有梯度浓度的标准体系，该标准体系为：将质粒RCA_BSI1-RCA_BSI9分组，每组的质粒数量至少为1，各组之间的用量不一致且各组中单一质粒的用量倍数满足10n，n为正整数；构建测序文库：将样本提取全部DNA，确定其具有浓度一致性和完整度后，适量加入所述标准内参体系，打断DNA至适当长度范围，至少经末端修复补齐、加A、连接接头、片段长度分选，再PCR扩增获得测序文库，对所述测序文库进行测序获得测序数据；构建RCA标准曲线：测序数据与所述质粒序列比对提取数据，绘制标准曲线，并获得线性方程；依据线性方程，计算样本目标对应的绝对拷贝数。
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