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申请/专利权人：暨南大学

摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及耐受低盐度的寇氏隐甲藻的制备方法、碎米水解液的应用及DHA的生产方法。本发明提供了耐受低盐度寇氏隐甲藻的制备方法，以及利用碎米水解液提高所述耐受低盐度寇氏隐甲藻的DHA产量的方法，能够在不依赖高盐度培养条件的情况下，有效培养寇氏隐甲藻，以避免生物反应器的氯离子腐蚀问题；同时降低DHA生产成本，特别是非传统碳源的使用，比如利用碎米水解液作为低成本碳源，代替昂贵的葡萄糖。

主权项：1.耐受低盐度的寇氏隐甲藻的制备方法，其特征在于，包括n轮适应性进化：第1轮适应性进化：步骤（1）：将寇氏隐甲藻接种于海盐浓度低于25gL的液体培养基1，培养至对数生长期，再接种于海盐浓度与所述液体培养基1相等的固体培养基1，培养，挑取藻落，再在固体培养基上进行划线分离得到单藻落，比较各藻落生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量，获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量最优的半适应藻落；步骤（2）：取步骤（1）所述的半适应藻落重复若干次步骤（1），直至获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量超过未驯化的所述寇氏隐甲藻的驯化藻落1；第2轮适应性进化：步骤（3）：将所述驯化藻落1接种于海盐浓度低于所述液体培养基1的海盐浓度的液体培养基2，培养至对数生长期，再接种于海盐浓度与所述液体培养基2相等的固体培养基2，培养，挑取藻落，再在固体培养基上进行划线分离得到单藻落，比较各藻落生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量，获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量最优的半适应藻落；步骤（4）：取步骤（3）所述的半适应藻落重复若干次步骤（3），直至获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量超过未驯化的所述寇氏隐甲藻的驯化藻落2；第n轮适应性进化：步骤（n）：将驯化藻落n-1接种于海盐浓度为8gL的液体培养基n，培养至对数生长期，再接种于海盐浓度与所述液体培养基n相等的固体培养基n，培养，挑取藻落，再在固体培养基上进行划线分离得到单藻落，比较各藻落生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量，获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量最优的半适应藻落；步骤（n+1）：取步骤（n）所述的半适应藻落重复若干次步骤（n），直至获得生长速率、葡萄糖消耗速率和脂质含量超过未驯化的所述寇氏隐甲藻的菌株，所述菌株即为耐受低盐度的寇氏隐甲藻。

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