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申请/专利权人：上海墨卓生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种用于不同组织解离的普适性方法，其包括以下步骤：将组织碎块与消化液I混合，进行第一消化反应后分层，取上清获得消化液A；取分层后剩余组织碎块，加入所述混合酶I进行第二消化反应，获得消化液B；合并消化液A和消化液B，加入分散酶进行第三消化反应，终止所述第三消化反应后获得消化液C；将所述消化液C进行过滤，离心后重悬。本发明提供的普适性方法获得的单细胞悬液活性可以达到85％以上，且不需要通过去死细胞的实验操作，细胞数目可达到106数量级以上；且可以同时操作多个样本，保留了细胞多样性，还保证了细胞悬液的质量，在提高解离效率的前提下还保证了解离的质量；具体良好的兼容性和普适性。
主权项：1.一种组织解离的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1将组织碎块与混合酶I混合，进行第一消化反应后分层，其中上层为上清，下层为剩余的组织碎块；所述混合酶I为0.1％胶原酶Ⅱ和0.1％胶原酶Ⅳ；2取1中上清置于1℃-8℃的冰水浴中，获得消化液A；3取1中所述剩余的组织碎块与所述混合酶I混合，进行第二消化反应，获得消化液B；4将消化液A、消化液B和分散酶混合，进行第三消化反应，反应终止后获得消化液C；5将所述消化液C进行过滤，离心后使用缓冲液重悬；其中，所述组织碎块来自E18胚胎小鼠的肝脏组织；步骤1中，所述组织碎块和混合酶I的重量体积比为10-25:1；所述重量体积比的单位为mgml；步骤1前，还包括用组织清洗液清洗组织碎块，分层后获得下层处理后的组织碎块的步骤；所述组织清洗液包括：137mMNaCl，5.4mMKCl，0.3mMNa2HPO4·2H2O，0.4mMKH2PO4，5.6mM葡萄糖，4.2mMNaHCO3，pH7.4，溶剂为水；所述组织碎块的尺寸为6-9mm3；步骤4中，所述分散酶为0.06％DispaseII；所述终止时还加入胎牛血清；所述胎牛血清的浓度为1％；步骤5中，所述离心后加入红细胞裂解液再进行重悬；所述红细胞裂解液包括150mMNH4Cl，10mMKHCO3和0.1mMEDTA，pH7.4。
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权利要求：
百度查询： 上海墨卓生物科技有限公司 一种用于不同组织解离的普适性方法
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