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申请/专利权人：河南师范大学
摘要：本发明公开了一种产蛋白酶芽孢杆菌的筛选方法及其在制备金黄色葡萄球菌抑菌剂中的应用，通过将土壤悬液高温处理后在牛乳固体培养基上富集、纯化得到菌株PPB05，经16SrRNA基因测序和系统进化树分析确定是贝莱斯芽孢杆菌，该菌株能够分泌耐酸、耐碱、耐高温的非蛋白质类抑菌物质，对金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制效果。本发明首次提出了贝莱斯芽孢杆菌通过抑制金黄色葡萄球菌合成群体感应信号分子AI‑2的能力，从而影响其生物膜的形成。本发明的贝莱斯芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌的生长和生物膜形成均有高效的抑制效果，可用于制备针对金黄色葡萄球菌的生防菌剂和微生物制剂，具有重要的农业应用价值。
主权项：1.一种产蛋白酶芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于具体步骤为：取植物根系附近表层1~5cm土壤样品1g重悬于10mL灭菌生理盐水中，充分震荡，获得土壤悬液；静置后，取上清液进行10-4-10-6梯度稀释，将不同梯度的稀释液于80℃加热5min后涂布在含有1.5wt%脱脂奶粉的牛乳固体培养基，于37℃培养48h，挑取有降解圈的单菌落于LB固体培养基上划线纯化，反复操作2~3次，获得纯种菌株，将纯种菌株进行-80℃甘油保存；提取所筛选菌株的基因组DNA作为模板，对其16SrRNA基因进行PCR扩增，PCR扩增条件为：94℃预变性2min，94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸45s，30次循环，72℃延伸2min，PCR扩增产物纯化后进行测序，测序结果与NCBI上进行BLAST比对，选取与测序结果相似度高的种或属，构建系统进化树，该产蛋白酶芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌；将测序后所筛选的菌株接种到LB固体平板上，于37℃恒温培养24~48h至菌落形成。
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百度查询： 河南师范大学 一种产蛋白酶芽孢杆菌的筛选方法及其在制备金黄色葡萄球菌抑菌剂中的应用
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