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申请/专利权人：中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)

摘要：本发明涉及一种测定烤烟中糯米香特征组分2‑乙酰基‑1‑吡咯啉含量的方法，以糯米香特征烤烟为研究对象，以准确测定烤烟中2‑乙酰基‑1‑吡咯啉的含量为研究目标，建立了稳定同位素稀释分析结合气相色谱‑串联三重四级杆质谱多离子反应监测模式准确定量烤烟烟叶及主流烟气中2AP的分析方法，并对样品中2AP的含量进行了测定。该方法的检出限和定量限分别低至1.79ugkg和5.97ugkg，在多离子反应监测模式下可实现复杂基质样品中目标痕量香气物质质谱信息的高效提取和精确定量。

主权项：1.一种测定烤烟中糯米香特征组分2-乙酰基-1-吡咯啉含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）标准溶液的配制：分别精确称量一定量溶于10%甲苯溶液的2-乙酰基-1-吡咯啉标准品和[13C5]-2-乙酰基-1-吡咯啉标准品于10mL容量瓶中并用二氯甲烷定容，将其分别稀释成10μgmL的2-乙酰基-1-吡咯啉标准溶液和50μgmL的内标储备液，利用上述配制好的储备液配制成2-乙酰基-1-吡咯啉浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μgmL的混标溶液，其内标浓度均为0.1μgmL，于2~4℃避光保存；（2）进行烟叶挥发物和主流烟气挥发物的提取；（3）进行气相色谱-串联三重四级杆质谱参数的优化和方法学验证；（4）气相色谱-串联三重四级杆质谱参数色谱条件：采用AgilentDB-5MS色谱柱，载气He流速为1.2mLmin；色谱柱升温程序为：起始柱温40℃，保持2min，以2℃min升至50℃，保持2min，以50℃min升至300℃，保持15min；进样口温度250℃，进样量1μL；不分流进样；质谱条件：电离方式：EI离子源，电子能量70eV；四级杆温度150℃；传输线温度250℃；离子源温度280℃；数据采集模式：1）全扫描模式，电子能量70eV，增益5，质量扫描范围mz33~200，扫描时间100ms，数据采样数3，步长0.1amu，阈值200；2）产物离子扫描，电子能量70eV，增益5，前级离子分别为83、87、111、116，碰撞能量为5、10、20、30eV，质量扫描范围mz33~200，扫描时间100ms，数据采样数7，步长0.1amu，阈值200；3）多反应监测模式，电子能量70eV，增益5，离子数4，驻留时间50ms，离子对为111＞82、111＞83、87＞70、116＞87，对应碰撞能量分别为20、5、25、3eV；（5）2-乙酰基-1-吡咯啉的定量分析采用稳定同位素内标法进行定量，计算公式如下： 式中：Cx——待测目标化合物含量，μgg；Ci——稳定同位素内标物质的质量浓度，μgμL；Vi——稳定同位素内标物质的进样体积，μL；Sx——待测目标化合物的定量离子峰面积，AU·min；Si——添加的稳定内标物质定量离子的峰面积，AU·min；m——待测样品质量，g；所述烟叶挥发物提取方法为：初烤烟叶样品去除主脉、切丝后，于30℃下干燥后研磨过40目筛，获得待测烟末样品，准确称取5.000g烟末，并加入所述内标储备液2μL，以20mL二氯甲烷为萃取剂，超声萃取30min，超声温度30℃，离心并收集萃取液，经0.45μm有机膜过滤后氮吹浓缩至1.0mL，每个样品平行处理三次，进样分析；所述主流烟气挥发物的提取方法为：挑选实验用卷烟，平衡烟支，进行主流烟气的捕集，在LX20型20孔道直线式自动吸烟机上抽吸卷烟样品，每种样品共抽吸5支，每口抽吸2秒，抽吸容量35mL，每口间隔60秒，采用44mm剑桥滤片捕集5支卷烟主流烟气的总粒相物，气相物则穿过剑桥滤片被装有内含2μL内标储备液的20mL二氯甲烷的100mL吸收瓶捕集，抽吸完成后，将剑桥滤片转移至玻璃离心管中并加入20mL二氯甲烷和2μL内标储备液，30℃超声萃取30min，5000rmin离心15min后收集萃取液，吸收瓶中的二氯甲烷经0.45μm有机膜过滤，氮吹浓缩至1mL，每个样品平行处理三次，进样分析。

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