买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：济南大学

摘要：基于Ag@EuW10‑PEI的糖类抗原19‑9CA19‑9电致化学发光传感器的制备方法。本发明通过树枝状高分子聚乙烯亚胺PEI聚集EuW10小分子，形成的纳米粒子具有良好的电致化学发光性质。随即将其与Ag纳米球复合，进一步提高了材料的电致化学发光强度。将其作为基底连接一抗用以捕获CA19‑9抗原，以二抗孵育的Co3O4@Au作为标记物，可以实现电致化学发光信号的有效猝灭。由此制备了夹心型的电致化学发光免疫传感器，用以灵敏检测CA19‑9。

主权项：1.一种基于Ag@EuW10-PEI的糖类抗原19-9CA19-9电致化学发光传感器的制备方法，所述的EuW10为一种含镧系金属元素铕的多金属氧酸盐，PEI聚乙烯亚胺为一种树枝状的高分子聚合物，可将EuW10聚集成纳米颗粒，所述的电致化学发光CA19-9传感器由玻碳电极、Ag@EuW10-PEI、CA19-9抗体、牛血清白蛋白、CA19-9抗原、Co3O4@Au组成；其特征在于，所述的制备方法包括以下制备步骤：一、材料的制备；二、电致化学发光CA19-9传感器的制备；其中，步骤一材料制备的具体步骤为：1EuW10的制备在圆底烧瓶中加入10~20mL去离子水，并置于85℃油浴中加热，搅拌几分钟后加入8.3gNa2WO4·2H2O，待溶液澄清后使用冰醋酸调节溶液pH值至7~7.5。之后，逐滴加入2mL浓度为1.23mol·L-1的EuNO33·6H2O溶液，搅拌5min后，趁热过滤除去不溶物，将得到的滤液冰水浴至大量结晶出现；再次过滤，干燥，收集白色晶体，即为EuW10粗产品，继续使用少量热水溶解重结晶提纯；2EuW10-PEI聚集体的制备将EuW100.04mM水溶液注入不同浓度的PEI水溶液中，制备EuW10-PEI球形聚集体。将最终PEI浓度固定在0.064µM，搅拌混合形成稳定的球形聚集体的胶体溶液。将得到的样品在25℃下平衡24小时，离心并用去离子水洗涤至少三遍后，分散至1mL水中，4℃冰箱保存；3Ag球的制备将2mL0.1mol·L-1的聚乙烯吡咯烷酮PVP:Mw=40000注入10mL水中，搅拌至溶解；加入200µL0.1mol·L-1的AgNO3溶液，搅拌5min后快速加入200µL抗坏血酸1mol·L-1；继续搅拌10min，离心并用乙醇洗涤3次，分散至1mL水中，4℃冰箱保存；4Ag@EuW10-PEI的制备首先通过巯基乙酸将Ag球羧基化，随即用N-羟基琥珀酰亚胺1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐EDCNHS振荡8h活化羧基；最后将Ag球与EuW10-PEI球形聚集体通过振荡结合得到珊瑚状的复合材料；5纳米立方体Co3O4的制备将60mg葡萄糖加入体积比1:1的水和乙醇60mL的混合溶液中搅拌5min。加入0.1mol·L-1六水硝酸钴，搅拌10分钟至完全溶解，然后加入5mL氢氧化钠的水溶液0.15mol·L-1，搅拌15min，然后混合物转移到高压反应釜中，180℃保存6h，沉淀用水和乙醇离心洗涤3次后在80℃下干燥12h，300℃煅烧3h，得到Co3O4纳米立方体；6Co3O4@Au抗体偶联物的制备首先合成了金纳米粒子，将1mL的HAuCl41%加入到100mL的去离子水中，加热至沸腾后快速加入2.5mL柠檬酸钠1%之后，混合物保持沸腾约15min，然后缓慢冷却至室温，形成酒红色金胶体，最后，将其转移到棕色瓶中并于4℃下保存，取5mgCo3O4超声分散在20mL制备好的金纳米粒子溶液中，振荡过夜得到Co3O4@Au。取1~2mL浓度为1µgmLCA19-9检测抗体Ab2加入上述溶液中，并在4℃下振荡8h，加入500~1000µL质量分数为1%的牛血清白蛋白BSA溶液，继续在4℃孵育6h占据非特异性位点；即得到Co3O4@Au抗体偶联物；其中，步骤二制备电致化学发光CA19-9传感器的具体步骤为：1将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0µm、0.3µm、0.05µm氧化铝抛光粉抛光处理，用超纯水冲洗干净；2将Ag@EuW10-PEI分散液超声至所有颗粒均匀分散为悬浮液，在玻碳电极表面滴加10µL上述悬浮液作为传感基底，将其置于37℃晾干；3滴加6µL、浓度为1mgmL的N-羟基琥珀酰亚胺EDC，1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐NHS，将其置于37℃晾干；4滴加6µL、浓度为10µgmL的CA19-9抗体溶液，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4℃晾干；5滴加3µL、质量分数为1~3%的牛血清白蛋白BSA溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4℃晾干；6滴加6µL、一定浓度的CA19-9标准溶液，37℃下孵化0.5~2h，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4℃晾干；7滴加10µL、浓度为1mgmL的抗体孵育的Co3O4@Au溶液，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4℃晾干，传感器构建完毕。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 济南大学 一种基于Ag@EuW₁₀-PEI的糖类抗原19-9(CA19-9)电致化学发光传感器的制备