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申请/专利权人：中国农业大学

摘要：本发明提供一种用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR‑Cas13d系统。本发明利用mCherry荧光报告基因，将PEDV病毒ORF3、E、M和N四个表达阅读框序列分别融合到mCherry基因的C端，构建筛选靶向PEDV表达阅读框的sgRNA高效作用靶点的荧光报告系统，利用CRISPR‑Cas13d高效切割mRNA的特性，进行高效率sgRNAs的快速筛选。然后利用筛选出的高效靶向结合的sgRNAs进行CRISPR‑Cas13d系统对靶病毒的高效降解。本发明提供的RNA病毒敲降方法具有高效率、高精准率及低脱靶率的优势。

主权项：1.猪流行性腹泻病毒基因编辑载体，其特征在于，包括基于CRISPR-Cas13d系统的串联sgRNA表达载体和含有Cas13d蛋白的表达载体；串联sgRNA选自⑦、⑧、⑨中的任一条：⑦靶向猪流行性腹泻病毒M基因和N基因的串联sgRNA，其作用位点的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；串联sgRNA为M5N10:，序列为5′-GAGGCCAAAGTATCCATAGAATAGCCATCTCAAGTAAACCCCTACCAACTGGTCGGGGTTTGAAACACGCTATTTTCGCCCTTGGGAATTCTCCTCCACTC-3′；⑧靶向猪流行性腹泻病毒N基因和ORF3基因的串联sgRNA，其作用位点的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；串联sgRNA为ORF3-3N10，序列为5′-GTTCACTAATTGTAGCATACTCGTCTAGTTGCAAGTAAACCCCTACCAACTGGTCGGGGTTTGAAACCGCTATTTTCGCCCTTGGGAATTCTCCTCCACTC-3′；⑨靶向猪流行性腹泻病毒ORF3基因和M基因的串联sgRNA，其作用位点的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；串联sgRNA为M5ORF3-3，序列为5′-GAGGCCAAAGTATCCATAGAATAGCCATCTCAAGTAAACCCCTACCAACTGGTCGGGGTTTGAAACTTCACTAATTGTAGCATACTCGTCTAGTTG-3′；所述含有Cas13d蛋白的表达载体为在Cas13d蛋白的两端连有NLS序列的载体；所述在Cas13d蛋白的两端连有NLS的序列如SEQIDNO:16所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业大学 用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR-Cas13d系统