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申请/专利权人：中国计量大学

摘要：本发明公开了一种赤霉素协同春化的草莓成花实验方法，本发明可以有效验证赤霉素协同春化作用对休眠期草莓植株生长发育的影响、以及对草莓植株成花的基因表达影响，赤霉素协同春化作用促进了成花基因FT、SOC1、LYF与CO的表达，同时又抑制了成花抑制基因SVP与TFL1的表达，使得草莓植株能够提前成花。

主权项：1.一种赤霉素协同春化的草莓成花实验方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：选取栽培草莓的脱病毒匍匐植株，将草莓匍匐茎苗种植于装有泥炭蛭石混合物的穴盘中分成若干处理组，在不同处理组的草莓植株叶片喷洒赤霉素、多效唑或者清水，并将植物转入春化条件的植物生长箱进行花诱导培养；步骤二：将花诱导结束的植株放于光照与温度为自然条件的大棚进行培养，同时使用经花诱导处理的植株作为空白对照组，收集植物的叶片、茎、茎尖、花的样本并记录植株叶长、叶宽、植株高度及开花的情况；步骤三：将采集叶片、茎、茎尖和花的样本后用锡纸包裹放入液氮中冷冻，冷冻完成后将样本放入超低温冰箱，在液氮中将草莓组织研磨成粉末后转移到离心管之中；步骤四：在离心管中加入已经预热好的CTAB，然后在通风橱内加入巯基乙醇，摇晃使其充分混合，将与药品混合好的样品放在65℃的水浴锅中预热后，在通风橱中加入苯酚-氯仿-异戊醇，之后在上下颠倒后，冰浴，再将离心机的温度降到4℃后离心；步骤五：在通风橱内将苯酚-氯仿-异戊醇加入到新的离心管中，然后取等体积步骤四离心结束的样品的上清液加入到新的离心管中，上下颠倒后冰浴，再将离心机的温度降到4℃后离心；步骤六：在新的离心管中加入乙醇，在乙醇中加入步骤五获得的上清液，摇晃均匀后在冰箱中沉淀，将沉淀后的溶液在温度降到4℃的离心机上进行离心；步骤七：将离心获得的溶液去除上清液，在冰上加入预冷过的无水乙醇，轻弹使其充分溶解、混匀，继续在降温到4℃的离心机中离心；步骤八：将离心后的溶液去上清液直至没有多余的上清液，在工作台上通风静置，加入DEPC水将沉淀充分溶解，使用微量分光光度计测定总RNA的纯度和浓度；步骤九：根据逆转录试剂盒的说明，取1μg总RNA混合PrimeScriptRTEnzymeMixⅠ进行逆转录，再将获得的cDNA稀释三倍，然后进行实时定量PCR循环。

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