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申请/专利权人：吉林大学第一医院
申请日：2024-04-15
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118294242A
主分类号：G01N1/30
分类号：G01N1/30;G01N21/64;C12N15/866;C07K19/00;G01N33/569;G01N33/533
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本案涉及特异性球形孢子丝菌荧光染色液、制备方法及检测方法，荧光染色液中含有：经荧光素标记的重组AP融合蛋白荧光抗体、荧光增白剂、渗透剂、背景增强剂和防淬灭剂；重组AP融合蛋白荧光抗体是利用Hsp70‑1_8抗原表位结构域的AP区序列重复2次的融合蛋白作为抗原，免疫家兔后的多克隆抗体经荧光标记所得。本发明所用球形孢子丝菌重组AP融合蛋白与天然抗原结构近似，可以特异性与球形孢子丝菌结合，与白色念珠菌等菌株均没有交叉反应，灵敏感高；且不受标本限制，能够快速地区分球形孢子丝菌和其他真菌，大大提高球形孢子丝菌的检出效率；本发明其它所有的成分均匀分散于水中，可稳定共存于同一体系中，使用过程更加方便快捷。
主权项：1.一种特异性球形孢子丝菌荧光染色液，其特征在于，每1L特异性球形孢子丝菌荧光染色液中含有：经荧光素标记的重组AP融合蛋白荧光抗体0.0015～0.005g、荧光增白剂0.5～1.5g、渗透剂5～15g、背景增强剂0.3～0.8g，防淬灭剂15～25g；其中，所述经荧光素标记的重组AP融合蛋白荧光抗体的制备过程包括如下步骤：1通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系，表达并纯化了球形孢子丝菌重组AP融合蛋白；2将球形孢子丝菌重组AP融合蛋白免疫家兔，经纯化后，获得球形孢子丝菌重组AP融合蛋白多克隆抗体；3将球形孢子丝菌重组AP融合蛋白多克隆抗体依次加入巯基乙胺和4-N-马来酰亚胺基甲基环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯中，分别反应1～2h，加入荧光素混合，反应过夜，加入乙基马来酰亚胺溶液，室温2h，终止反应，经离心、除去沉淀后，用磷酸盐缓冲液在截留分子量100K的超滤离心管中洗涤得到荧光标记的重组AP融合蛋白多克隆抗体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学第一医院 特异性球形孢子丝菌荧光染色液、其制备方法及检测方法
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