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申请/专利权人：中国海关科学技术研究中心

摘要：本发明提供一种六种疟原虫单管检测和分型的检测试剂盒，包括检测液、核酸提取液I、核酸提取液II、核酸沉淀液、核酸保存液、阳性对照和阴性对照。该方法通过改良荧光PCR技术，在原有体系基础上增加通用探针，结合扩增出不同大小产物，并根据产物的熔解温度实现不同靶标的鉴别诊断，从而实现对恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫的检测和分型。该方法具有特异性高、灵敏度高、成本低、操作简便等优点，并且不会与其他引起发热的血液寄生虫发生交叉反应，为疟原虫检测提供了一种方便快捷、高效准确的新途径。

主权项：1.一种六种疟原虫单管检测和分型的检测试剂盒，其特征在于，所述六种疟原虫单管检测和分型的检测试剂盒包括：检测液、核酸提取液I、核酸提取液II、核酸沉淀液、核酸保存液、阳性对照、阴性对照；所述检测液包括：qPCR反应缓冲液、引物和探针混合液、酶缓冲液；所述qPCR反应缓冲液包括：2×荧光PCR反应缓冲液、dNTP、DEPC水；所述酶缓冲液包括：TaqDNA聚合酶、DEPC水；所述核酸提取液I包括：2mM-500mMNaOH，0.5％-5％SDS；优选的200mMNaOH，1％SDS；所述核酸提取液II包括：3M醋酸，0.1MTris-HClpH5.0；所述核酸沉淀液包括：无水乙醇；所述阳性对照包括：恶性疟原虫人工合成质粒，三日疟原虫人工合成质粒，间日疟原虫人工合成质粒，卵型疟curtisi亚种人工合成质粒，卵型疟wallikeri亚种人工合成质粒，以及诺氏疟原虫人工合成质粒，各种质粒的浓度各自分别为1×105-1×107copiesmL；所述阴性对照为：DEPC水；所述引物和探针混合液包括：上游引物、下游引物、Pf探针、Pv探针、Pm探针、Pk探针、Pc探针、Pw探针、通用探针I、通用探针II；所述引物和探针的序列5’-3’分别为：上游引物SEQIDNO:1AAGTTAAGGGAGTGAAGACGATCAGA下游引物SEQIDNO:2CCAAAGACTTTGATTTCTCATAAAPf探针SEQIDNO:3 GTTCTGGGCTCTACGAGCAATCTAAAAGTCACCTCGAAAGATGACTPv探针SEQIDNO:4 GGATCGTTCTGGGCAATCTAAGAATAAACTCCGAAGAGAAAATTCTPm探针SEQIDNO:5 GGCTCTACGACCACTAAGGAAGCTATCTAAAAGAAACACTCATATATAPk探针SEQIDNO:6 CAGTTCGGTCAGTGAATCCCGAAGAGACTATCCTCATPc探针SEQIDNO:7 GCTCCAGTTCGGTCAGATTTTTAAATAAGAAAATTCCTTTCGGGGAPw探针SEQIDNO:8 GTGCGTGCTCCAGGTTTTGGATGAAAGATTTTTAAATAAGAAAATTCCTTTTGGA通用探针ISEQIDNO:9CACCGGCTAAGACGCGCCGGTGTGTTGGTCGTAGAGCCCAGAACGATCC通用探针IISEQIDNO:10CCGCAGAAGATGAGATCTGCGGTGTTCACTGACCGAACTGGAGCACGCAC。

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