龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！
申请/专利权人：海南医学院
摘要：本发明属于环境监测和生物检测技术领域，公开了一种复杂水体中毕氏肠微孢子虫与芽囊原虫的检测方法及应用，该方法包括如下步骤：S1：水体样本的前处理；S2：核酸提取；S3：筛选特异性引物；S4：PCR检测；基于特别设计的特异性引物，对毕氏肠微孢子虫ITS基因和芽囊原虫500bpSSUrRNA基因的特异性巢式PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳成像、基因双向测序及序列比对，再根据电泳结果判断样本中是否含有毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫，最后通过基因测序鉴定出毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的基因型亚型。本发明与传统的显微镜下观察及其他方法相比准确率和灵敏度更高，对两虫的目标扩增片段检测限低至1000copy，可快速鉴定虫种及其基因型亚型，有利于两虫新基因型新亚型的发现，应用范围广。
主权项：1.一种复杂水体中毕氏肠微孢子虫与芽囊原虫的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：S1：水体样本的前处理采用真空抽滤、丙酮溶解滤膜、加入PBS缓冲液离心后收集沉淀的方法，富集复杂水体样本中的微生物，并且去除可能干扰PCR检测结果的杂质；S2：核酸提取将沉淀用缓冲液涡旋震荡至充分混匀，加入蛋白酶后离心取上清液，用核酸提取试剂盒提取样本的全基因组DNA；S3：筛选特异性引物比较毕氏肠微孢子虫16srRNA基因位点特异性扩增引物和特殊设计的ITS基因位点特异性扩增引物对已知毕氏肠微孢子虫阳性样本的PCR扩增效果，比较芽囊原虫260bpSSUrRNA基因位点特异性扩增引物和特殊设计的500bpSSUrRNA基因位点特异性扩增引物对已知芽囊原虫阳性样本的PCR扩增效果，从而实现毕氏肠微孢子虫与芽囊原虫巢式PCR扩增特异性引物的筛选和反应体系的优化。S4：水体样本的PCR检测采用优选的ITS基因位点特异性引物对毕氏肠微孢子虫进行PCR扩增，采用优选的500bpSSUrRNA基因位点特异性引物对芽囊原虫进行PCR扩增，对阳性产物进行双向测序，以定性判断水体样本中是否存在中毕氏肠微孢子虫与芽囊原虫。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 海南医学院 一种复杂水体中毕氏肠微孢子虫与芽囊原虫的检测方法及应用
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号