申请/专利权人：云南农业大学

申请日：2022-02-17

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN114624077B

主分类号：G01N1/28

分类号：G01N1/28;G01N1/34;G01N1/40;B01D15/08

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.28#授权;2022.07.01#实质审查的生效;2022.06.14#公开

摘要：本发明公开了一种无硝干腌火腿中锌‑原卟啉Ⅸ的提取纯化方法，包括如下步骤：将干腌火腿股二头肌样品剔除脂肪后进行真空冷冻干燥；取冷冻干燥后的股二头肌样品，使用90％丙酮水溶液对样品中的锌‑原卟啉Ⅸ进行粗提取；将粗提液用蒸馏水进行1:1vv稀释，通过滤纸过滤后加样到反向C18固相萃取小柱上进行纯化；收集纯化洗脱液，用氮吹仪去除纯化液中的丙酮，移入真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到锌‑原卟啉Ⅸ纯化样品。本发明提取无硝干腌火腿中锌‑原卟啉Ⅸ的过程简单，提纯效果较好，反向C18固相萃取小柱对锌‑原卟啉Ⅸ的吸附效果较好，提高了产物的回收率。

主权项：1.一种无硝干腌火腿中锌-原卟啉Ⅸ的提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，样品预处理腌制成熟的无硝干腌火腿，经洗霉修割后，取下干腌火腿的股二头肌部分，去除股二头肌中肉眼可见的脂肪和结缔组织，将其切成小块后放入斩拌机斩拌30s，斩拌后的火腿肉糜样品放入外层包裹有锡箔纸的一次性塑料碗中，将其放入-80℃冰箱速冻，移入真空冷冻干燥机中，在-58℃、0Pa条件下冷冻干燥3d，取出后迅速用液氮研磨粉碎，并装入真空包装袋中保存；S2，无硝干腌火腿中锌-原卟啉Ⅸ的粗提取称取4.00g冷冻干燥后的火腿样品于50mL避光离心管中，并加入20mL事先预冷好的90%丙酮水溶液，摇动数秒后将避光离心管整体浸入冰中，同时使用高速分散器以10000rmin高速匀浆2次，每次15s，中间间隔数秒，然后超声提取10min；提取完成后，取出避光离心管，以4℃、10000rmin的条件离心5min，将上清液通过一次性定性滤纸过滤并收集到避光离心管中，剩余样品残渣再加入20mL事先预冷好的90%丙酮水溶液重复步骤S2提取1次，合并2次提取所得上清液并摇匀；S3，无硝干腌火腿中锌-原卟啉Ⅸ的纯化使用微固相萃取装置对90%丙酮水溶液提取所得的锌-原卟啉Ⅸ粗提液进行纯化；将S2中提取所得粗提液用蒸馏水1:1稀释，混匀后使用一次性定性滤纸过滤，随后转移到一次性反向C18固相萃取小柱上进行纯化，每根小柱上样量为50mL；在上样之前，先依次加入10mL甲醇和10mL蒸馏水预洗活化反向C18固相萃取小柱，打开真空泵，调节预洗活化液流速为1mLmin，预洗活化结束后迅速加入待净化液，调节流速使待净化液以1mLmin的速度过柱，待样品溶液流尽后，接着加入15mL蒸馏水洗涤柱子，最后再用10mL90%丙酮水溶液洗脱截留在反向C18固相萃取小柱上的物质，收集纯化洗脱液；将收集得到的纯化洗脱液再用蒸馏水1:1稀释，使用一次性定性滤纸过滤后重复步骤S3反向C18固相萃取小柱进行二次纯化；收集二次纯化洗脱液，使用氮吹仪在室温下氮吹至近干，除去丙酮，移入真空冷冻干燥机，在-58℃、0Pa条件下进行冷冻干燥，收集冻干样品即为锌-原卟啉Ⅸ纯化样。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 云南农业大学 一种无硝干腌火腿中锌-原卟啉Ⅸ的提取纯化方法

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