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申请/专利权人：广州华越肾科再生医学科技有限公司
摘要：本发明公开了一种肾小管上皮细胞分离与培养方法，包含以下步骤：S1：组织机械分离：采取肾组织样本，分离皮质部分后剪碎；S2：酶解：混合酶消化、离心；S3：细胞培养：完全培养基重悬细胞沉淀，接种于培养瓶中。其中机械分离简易性，最大化减少机械破坏。温和酶解达到最好的消化效率，获得的细胞活性高，使得获取的细胞活性能达到50％以上，细胞数量至少达到1×106个g，而且具有高增殖性，高起始接种密度，使得细胞的增殖环境压力较少，加上富含营养且简便的营养基，无需基质层铺板，也能使得细胞增殖速度比文献报道要至少快一倍；如1×106细胞接种在T75瓶中，72h便可达到完全汇合。
主权项：1.一种肾小管上皮细胞分离与培养方法，其特征在于，包含以下步骤：S1：组织机械分离：将肾皮质组织分割成组织碎块；S2：酶解：第一消化酶消化组织碎块，离心去上清，再用第二消化酶消化获得细胞；S3：细胞培养：将获得的细胞接种培养基培养；所述第一消化酶为分散酶和胶原酶；所述第二消化酶为胶原酶；所述第一消化酶的消化时间为45～75min，第二消化酶的消化时间为40～60min；所述胶原酶为II型胶原酶或IV型胶原酶；所述第一消化酶中分散酶浓度为0.75～1.5mgmL，胶原酶的浓度为1～2.5mgmL；所述第二消化酶的浓度为1～2.5mgmL；所述第一消化酶中的胶原酶和第二消化酶中的胶原酶不同；所述第一消化酶中分散酶和胶原酶的体积比为1:0.5～2。
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