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申请/专利权人：南京理工大学
申请日：2022-12-13
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118185981A
主分类号：C12N15/82
分类号：C12N15/82;C12N15/62;C12N15/65;C12N15/66;C12N1/13;C07K1/22;C12R1/89
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.02#实质审查的生效;2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种基于不同光照下莱茵衣藻的蛋白相互作用分析方法。所述方法将含有向光性目标蛋白和抗性基因ShBle的质粒在莱茵衣藻中融合表达，利用博来霉素筛选出阳性克隆株，然后将阳性克隆株在不同光照下大规模培养，最后利用StrepⅡTag亲和柱同时纯化向光性目标蛋白以及与向光性目标蛋白发生相互作用的相关蛋白。本发明方法不需要额外的筛选标记，大大降低了转化株筛选工作量。本发明方法可以扩展到几乎所有莱茵衣藻光致蛋白信号传递通路的分析检测。
主权项：1.基于不同光照下莱茵衣藻的蛋白相互作用分析方法，其特征在于，具体步骤如下：将含有向光性目标蛋白和抗性基因ShBle的质粒在莱茵衣藻中融合表达，利用博来霉素筛选出阳性克隆株，然后将阳性克隆株接种到TAP培养基，待菌液生长至OD600为0.6，将菌液以1:50的比例二次接种到TAP培养基中，并在不同光照下大规模培养，所述的光照条件为1:1的25％红光和25％蓝光构成的红蓝光、25％红光、25％蓝光或黑暗条件，最后利用StrepⅡTag亲和柱同时纯化向光性目标蛋白以及与向光性目标蛋白发生相互作用的相关蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京理工大学 基于不同光照下莱茵衣藻的蛋白相互作用分析方法
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