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申请/专利权人：济南大学

摘要：本发明涉及一种基于Ag‑Cys和Cu‑MOFsSOx之间的电子转移检测癌胚抗原的电化学发光传感器的制备方法，属于新型传感器构建技术领域。基于抗原抗体之间良好的特异性，该传感器利用L‑Cys功能化的Ag杂化纳米材料Ag‑Cys作为基底发光材料，肌氨酸氧化酶包裹的Cu‑MOFs为猝灭剂，通过层层组装构建了电化学发光传感器。本发明构建的电化学发光传感器具有较宽的检测范围，较高的灵敏度和较低的检出限，对癌胚抗原的检测具有重要的意义。

主权项：1.一种基于Ag-Cys和Cu-MOFsSOx之间的电子转移检测癌胚抗原的电化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）用Al2O3抛光粉打磨直径为4mm的玻碳电极，超纯水清洗干净，将6µL、0.25~2.5mgmL-1的L-Cys功能化的Ag杂化纳米材料Ag-Cys并结合癌胚抗原识别抗体的一抗标记物Ag-Cys-Ab1溶液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；（2）滴加3µL、质量分数为0.1%的BSA溶液到电极表面，用超纯水洗净，室温下晾干；（3）滴加6µL、0.00005~50ngmL-1的一系列不同浓度的癌胚抗原到电极表面，孵化2h，超纯水冲洗，室温下晾干；（4）滴加6µL的肌氨酸氧化酶包裹的Cu-MOFs并结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Cu-MOFsSOx-Ab2溶液，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种电化学发光传感器；所述的肌氨酸氧化酶包裹的Cu-MOFs并结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Cu-MOFsSOx-Ab2溶液的制备步骤如下：Cu-MOFs的制备首先，将0.3gCuCH3COO2和4gC6H5COOH作为调节剂溶于30mL正丁醇中得到溶液A，将0.8gH3BTC溶于30mLDMF中配制成B溶液，将B溶液缓慢加入到A溶液中搅拌30min，在加入H3BTC的过程中观察到蓝色沉淀，将所得沉淀物离心，并使用乙醇洗涤3次，以去除溶剂和剩余未反应的有机酸，将得到的产物在60℃下真空干燥12h，得到Cu-MOFs；Cu-MOFsSOx的制备将10mg制备的Cu-MOFs分散在1mL无水乙醇中。随后，将Cu-MOFs溶液与6mL含有0.542mgmLEDC和1.125mgmLNHS的水溶液混合，在剧烈搅拌下反应30min，然后，在搅拌下，将0.67mgmL的SOx水溶液3mL滴入上述混合液中，搅拌4h后，将所得Cu-MOFsSOx离心水洗3次，收集沉淀；将100μL10μgmL-1癌胚抗原识别抗体Ab2加入1mL1.5mgmL-1Cu-MOFsSOx水溶液中，并在4℃下孵化12h，随后加入100μL1%BSA以阻断非特异性位点并离心以除去未结合的抗体，将得到的固体分散在1mLpH7.4的PBS中，即得肌氨酸氧化酶包裹的Cu-MOFs并结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Cu-MOFsSOx-Ab2溶液。

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