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申请/专利权人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院
摘要：本发明公开了基于4‑WJ结构触发的双重RCA扩增的电化学外泌体检测体系，属于肿瘤检测领域；电化学外泌体检测体系包括电化学传感器的工作电极，通过金电极表面修饰纳米金颗粒以提高金电极表面积并有助于结合适配体1，在适配体1捕获靶外泌体后，外泌体进一步结合适配体2形成“三明治夹心”结构，该结构通过双重适配体可以显著提高检测特异性。随后，通过DNA四向连接结构DNAfour‑wayjunction，4‑WJ触发的双重RCA体系实现目标信号的指数扩增；最后，通过亚甲基蓝G‑四联体DNA酶技术有助于电化学信号的进一步放大，实现高灵敏度检测。
主权项：1.基于4-WJ结构触发的双重RCA扩增的电化学外泌体检测体系，其特征在于：电化学外泌体检测体系包括电化学传感器的工作电极，DNA四向连接结构，RCA扩增体系和亚甲基蓝反应溶液；所述工作电极为功能化AuNPs修饰的电极；所述功能化AuNPs修饰的电极为AuNPs修饰的电极表面连接特异识别外泌体的适配体1；所述适配体1核酸链的序列如SEQIDNO.1所示；所述DNA四向连接结构包括与外泌体识别的适配体2DNA链，U链构成的分子信标探针以及由F链和M链构成的二元DNA探针；所述适配体2DNA链分别与F链和M链互补，所述U链与F链和M互补，杂交能形成DNA四向连接结构；所述适配体2DNA链的序列如SEQIDNO.2所示；所述U链的序列如SEQIDNO.3所示；所述F链的序列如SEQIDNO.4所示；所述M链的序列如SEQIDNO.5所示；所述RCA扩增体系包括浓度为10UμL的phi29DNA聚合酶，10mMdNTPs，20mgmL牛血清白蛋白、10×phi29DNA聚合酶反应缓冲液，富含C碱基的cDNA；所述富含C碱基的cDNA的序列如SEQIDNO.6所示；所述亚甲基蓝反应溶液包括含1mM亚甲基蓝、pH8.0、10mMHEPES和100mMKCl。
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百度查询： 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 基于4-WJ结构触发的双重RCA扩增的电化学外泌体检测体系及其检测方法
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