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一种EPO刺激巨噬细胞来源外泌体的制备与应用 

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申请/专利权人:吉林大学

摘要:本发明适用于生物医药技术领域,提供了一种EPO刺激巨噬细胞来源外泌体的制备与应用,制备方法包括以下步骤:步骤1、使用EPO刺激对数期生长的M0巨噬细胞24h,随后收集细胞培养上清液;步骤2、将细胞培养上清液进行梯度离心,收集沉淀,洗涤后收集上清;步骤3、将含有外泌体的上清通过外泌体纯化柱,离心,收集滤过液体,即得EPO刺激巨噬细胞来源外泌体。该方法构建了兼具抗炎和成骨功能的外泌体,该外泌体能重新编程M1型巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,效果显著,实现对成骨免疫微环境稳态的调控,促进炎症环境下的骨组织再生修复。同时,该方法简便,无免疫原性问题,体内生物安全性高。

主权项:1.一种EPO刺激巨噬细胞来源外泌体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1、使用EPO刺激对数期生长的M0巨噬细胞24h,随后收集细胞培养上清液;步骤2、将步骤1得到的细胞培养上清液进行梯度离心,收集沉淀,洗涤后收集上清;步骤3、将步骤2得到的含有外泌体的上清通过外泌体纯化柱,离心,收集滤过液体,即得EPO刺激巨噬细胞来源外泌体;在所述步骤1中,采用的EPO浓度为20UmL;在所述步骤2中,细胞培养上清液的梯度离心包括以下具体步骤:温度为4℃,进行1000g离心10分钟,去除培养基中的碎片和死细胞,收集上清,然后通过0.22μm过滤器过滤,再次收集上清;温度为4℃,进行100000g离心4小时,收集沉淀并用PBS重悬;温度为4℃,进行100000g离心20分钟,洗涤沉淀,收集沉淀,即可获得EPO-exo,将EPO-exo重悬在200μL无菌无酶水中,-80℃保存备用;在所述步骤1中,巨噬细胞对数期生长密度控制在20万个cm2;在所述步骤1中,巨噬细胞为巨噬细胞系RAW264.7细胞。

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