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TNFRSF1B基因人源化动物模型的构建方法及应用 

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申请/专利权人:上海南方模式生物科技股份有限公司;上海砥石生物科技有限公司;广东南模生物科技有限公司

摘要:本申请提供一种TNFRSF1B基因人源化动物模型的构建方法及应用。本申请构建的人源化TNFRSF1B基因改造动物模型能够加速与人TNFRSF1B基因或蛋白相关的领域的研究进展,例如利用人源化TNFRSF1B基因改造动物模型代替人试药,为进行TNFRSF1B靶点药物的临床前实验提供有效的模型和有力的工具。

主权项:1.一种TNFRSF1B基因人源化动物细胞的构建方法,其特征在于,包括:在非人动物细胞内导入人TNFRSF1B基因,使所述人TNFRSF1B基因在非人动物细胞中表达产生人源化的TNFRSF1B蛋白,同时降低或消除所述非人动物细胞内的内源TNFRSF1B基因的表达;利用基因编辑技术对非人动物细胞内的内源TNFRSF1B基因进行改造,得到人源化TNFRSF1B基因;所述非人动物为小鼠;所述细胞为受精卵细胞;所述构建方法采用CRISPRCas9基因编辑技术实现;所述构建方法具体包括:提供包括人TNFRSF1B基因同源重组载体、sgRNA以及Cas9的混合物,所述Cas9包括Cas9mRNA和或Cas9蛋白,将所述混合物注射到所述非人动物细胞中,将所述非人动物细胞转移至培养液中进行培养;所述人TNFRSF1B基因同源重组载体包括从5’端到3’端依次排列的5’同源臂、人TNFRSF1B基因、小鼠Tnfrsf1b基因、polyA以及3’同源臂;所述人TNFRSF1B基因的序列由人TNFRSF1B基因内含子1的部分序列与人TNFRSF1B基因的部分编码区序列组成;所述人TNFRSF1B基因内含子1的部分序列如SEQIDNO:1所示,所述人TNFRSF1B基因的部分编码区序列如SEQIDNO:2所示;所述小鼠Tnfrsf1b基因的序列如SEQIDNO:3所示;所述小鼠Tnfrsf1b基因与所述polyA之间还设置有WPRE调控元件,所述WPRE调控元件的序列如SEQIDNO:4所示;所述polyA的序列如SEQIDNO:5所示;所述5’同源臂的DNA序列如SEQIDNO:11所示;所述3’同源臂的DNA序列如SEQIDNO:12所示;所述sgRNA的靶位点序列如SEQIDNO:29所示。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 上海南方模式生物科技股份有限公司 上海砥石生物科技有限公司 广东南模生物科技有限公司 TNFRSF1B基因人源化动物模型的构建方法及应用

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