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申请/专利权人：深圳泽医细胞治疗集团有限公司

摘要：本发明提供了一种CD56dimCD16+NK细胞培养试剂盒、培养方法及应用，试剂盒包括刺激因子A液、活化培养基B液和扩增培养基C液；刺激因子A液包括CD16抗体、NKp30抗体、NKp44抗体和NKp46抗体的至少一种；活化培养基B液包括IL‑2、IL‑7、IL‑12、IL‑15、IL‑21、L‑抗坏血酸、5‑氨基乙酰丙酸、A群链球菌OK432、EuphoscopinC细胞增强剂和自体血浆；扩增培养基C液包括IL‑2、IL‑12、IL‑15、L‑抗坏血酸、FMS样酪氨酸激酶3配体、环糊精和自体血浆。基于本发明的培养试剂盒和培养方法，将人外周血单个核细胞在体外共培养2～3周后，能使CD56dimCD16+NK细胞的占比＞90％，表达靶向肺部标志性趋化因子CCR5和CXCR3的阳性细胞比例均＞90％，且对A549肺癌细胞的杀伤率＞90％。

主权项：1.一种CD56dimCD16+NK细胞培养试剂盒，其特征在于，包括：刺激因子A液、活化培养基B液和扩增培养基C液；所述刺激因子A液包括CD16抗体、NKp30抗体、NKp44抗体和NKp46抗体；所述活化培养基B液包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、L-抗坏血酸、5-氨基乙酰丙酸、A群链球菌OK432、EuphoscopinC细胞增强剂和自体血浆；所述扩增培养基C液包括IL-2、IL-12、IL-15、L-抗坏血酸、FMS样酪氨酸激酶3配体、环糊精和自体血浆；在所述活化培养基B液中，IL-2的浓度为200～500UmL，IL-7的浓度为3000～7500UmL，IL-12的浓度为30～50ngmL，IL-15的浓度为50～100ngmL，IL-21的浓度为30～50ngmL，L-抗坏血酸的浓度为50～100μgmL，5-氨基乙酰丙酸的浓度为40～100uM，A群链球菌OK432的浓度为0.05～0.1KEmL，EuphoscopinC细胞增强剂的浓度为3～10μM，自体血浆的浓度为1～10%；在所述扩增培养基C液中，IL-2的浓度为400～1000UmL，IL-12的浓度为0.5～1ngmL，IL-15的浓度为40～100ngmL，L-抗坏血酸的浓度为50～100μgmL，FMS样酪氨酸激酶3配体的浓度为50～100ngmL，环糊精的浓度为3～10mM，自体血浆的浓度为0.5～5%。

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