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申请/专利权人：华东理工大学
摘要：本发明公开了一种适用于珍贵束丝放线菌的基因编辑质粒，所述基因编辑质粒以CRISPR‑Cas9质粒工具的骨架为基础，通过根据珍贵束丝放线菌A.pretiosum的偏好，将Cas9蛋白编码序列cas9核酸序列的密码子优化；将优化后的Cas9蛋白编码序列亚克隆到CRISPR‑Cas9质粒工具的骨架上；以pIJ101复制子取代质粒骨架上原有的温敏型复制子pSG5；以及在sgRNA启动子ermEp*下游插入限制性内切酶XmaJI的酶切位点而实现。本发明还公开了所述基因编辑质粒用于改造珍贵束丝放线菌以提高安丝菌素P‑3的产量的应用。本发明的基因编辑质粒实现了基因组规模的基因多次迭代编辑，为关于珍贵束丝放线菌A.pretiosum的新代谢产物的挖掘、底盘菌株的设计、代谢途径工程改造与代谢调控机制等方面的研究提供了操作性更高的工具。
主权项：1.一种适用于珍贵束丝放线菌A.pretiosum的基因编辑质粒pCRISPR-Cas9apre，其特征在于，所述基因编辑质粒pCRISPR-Cas9apre以包含有硫链丝菌素抗性基因tsr、温敏型复制子pSG5rep、转移起始位点oriT、阿泊拉抗性基因ApmR、由启动子ermEp*驱动的sgRNA表达盒、以及驱动cas9基因表达盒的诱导型启动子tipAp*的CRISPR-Cas9质粒工具的骨架为基础，通过以下操作得到：根据珍贵束丝放线菌A.pretiosum的偏好，将Cas9蛋白编码序列cas9核酸序列的密码子优化成cas9ap，优化的核酸序列如SEQIDNO.1中3570-7676位点所示；将优化后的Cas9蛋白编码序列cas9ap亚克隆到CRISPR-Cas9质粒工具的骨架上，以利用tipAp启动子驱动密码子优化后的cas9ap；以pIJ101作为该系统的复制子，取代质粒骨架上原有的温敏型复制子pSG5；以及在sgRNA启动子ermEp*下游插入限制性内切酶XmaJI的酶切位点。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华东理工大学 一种珍贵束丝放线菌的基因编辑质粒及其应用
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