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申请/专利权人:中国农业科学院农业基因组研究所
摘要:本发明涉及生物工程领域,具体地,涉及一种基因组短片段文库的构建方法。本发明包括以下步骤:S1、细胞全基因组提取;S2、基因组片段化和产物回收纯化;S3、MNase酶切和产物回收;S4、电泳和胶回收;S5、末端修复和接头连接;S6、载体克隆与文库构建。本发明通过无序列偏好性的酶切方法富集得到的15‑50bp长度的短片段DNA文库涵盖了动物全基因组的完整信息,该方法操作简便,技术体系稳定,为调控元件基序的序列信息解析提供了便利。
主权项:1.一种基因组短片段文库的构建方法,包括以下步骤:S1、细胞全基因组提取;S2、基因组片段化和产物回收纯化:将步骤S1提取出的全基因组利用超声仪打断并回收打断产物;S3、MNase酶切和产物回收:将步骤S2的打断产物进行MNase酶切并回收酶切产物;S4、电泳和胶回收:将步骤S3的酶切产物进行电泳,切割15-50bp范围的片段回收;S5、末端修复和接头连接:将步骤S4回收得到的DNA片段进行末端修复加A,然对末端修复后的DNA片段进行adapter连接,获得adapter连接产物;S6、载体克隆与文库构建:将步骤S5获得adapter连接产物添加载体同源臂然后进行载体克隆,获得重组产物,将重组产物转化培养后提取重组质粒,以重组质粒为模板进行扩增,以扩增后产物作为inputDNA进行DNA测序文库的构建。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 中国农业科学院农业基因组研究所 一种基因组短片段文库的构建方法
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