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申请/专利权人：山东第一医科大学(山东省医学科学院);山东大学苏州研究院
摘要：本发明提供了一种基于回文序列的DNA分子量标准制备方法，属于分子生物学技术领域，包括以下步骤：根据DNA分子量标准设计含回文序列的串联引物，进行QuickchangePCR反应，扩增靶质粒。串联引物间碱基的互补配对，在质粒中重复产生多拷贝回文序列产物，挑取目标条带转化感受态菌；设计制备引物，通过PCR获得多拷贝DNA片段，筛选出多拷贝质粒的克隆，最后对DNA扩增条带的浓度均一化获得DNA分子量标准。本发明的方法适用于制备小分子量DNA分子量标准时，有速度快、成本低、分辨率高等优势，适用于制备DNA片段跨度20‑100bp，DNA片段长度100‑1200bp范围的DNA分子量标准。
主权项：1.一种基于回文序列的DNA分子量标准的制备方法，其特征在于，所述方法至少包括如下步骤：①以靶质粒为模板，加入串联引物进行QuickchangePCR扩增获得多拷贝回文序列产物，回收该多拷贝扩增产物，酶切处理后转入感受态菌中；②加入检测引物进行PCR扩增并筛选筛选含相应分子量的多拷贝阳性克隆；③根据目标分子量设计制备引物对所述多拷贝质粒进行扩增，将扩增产物定量后混合即为上述DNA分子量标准；所述串联引物中部包括回文序列，即所述串联引物中自5’端至3’端依次为上游序列、回文序列及下游序列，其中回文序列的长度为15～25bp，而下游序列长度大于上游序列形成缺刻；所述串联引物的长度为60bp以内。
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权利要求：
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