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申请/专利权人：青岛科技大学
摘要：本发明提出了一种生产葎草酮用工程大肠杆菌的构建方法及其应用。本发明的构建方法包括：以工程大肠杆菌为出发菌株，将源于工程大肠杆菌的异戊二烯焦磷酸异构酶进化后的基因和来源于啤酒花的异戊二烯基转移酶进化后的基因以及单加氧酶基因构建到载体质粒中，得第一表达载体；将来源于啤酒花的戊二酮合酶进化后的基因、胞质辅酶A连接酶进化后的基因和异戊二烯基转移酶进化后的基因片段构建到另外一个载体质粒中，得第二表达载体；将表达载体转入工程大肠杆菌，得生产葎草酮用工程大肠杆菌；本发明还给出利用上述工程大肠杆菌生物法合成葎草酮的方法。本发明的合成方法步骤少，纯度高，质量稳定，摆脱了对啤酒花原料的依赖，避免了溶剂的大量消耗。
主权项：1.一种生产葎草酮用工程大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以pTrcHis2B为出发质粒，将源于工程大肠杆菌的异戊二烯焦磷酸异构酶进化后的基因和来源于啤酒花的异戊二烯基转移酶进化后的基因以及单加氧酶基因构建到载体质粒pTrcHis2B中，得表达载体pTrcHis2B-idi-pt1-monooxygenase，异戊二烯焦磷酸异构酶进化后的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，异戊二烯基转移酶进化后的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，单加氧酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；2）以pACYCDuet-1为出发质粒，将来源于啤酒花的戊二酮合酶进化后的基因、胞质辅酶A连接酶进化后的基因和异戊二烯基转移酶进化后的基因片段构建到载体质粒pACYCDuet-1中，得表达载体pACYCDuet-1-vps-ccl2-pt2，戊二酮合酶进化后的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，胞质辅酶A连接酶进化后的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，异戊二烯基转移酶进化后的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示；3）将步骤1）所得的表达载体pTrcHis2B-idi-pt1-monooxygenase和步骤2）所得的表达载体pACYCDuet-1-vps-ccl2-pt2转入工程大肠杆菌BL21DE3-Trc-low，得生产葎草酮用工程大肠杆菌。
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百度查询： 青岛科技大学 一种生产葎草酮用工程大肠杆菌的构建方法及其应用
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